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生物制药技术第三章：蛋白质表达与纯化

引言

在生物制药领域中，蛋白质表达与纯化是最基础且关键的技术之一。蛋白质作为生物体内最重要的功能分子之一，广泛参与细胞的各种生物过程，并可被用于生产药物和疫苗。

蛋白质表达是指在外源表达系统中产生目标蛋白质。纯化则是从表达的混合物中将目标蛋白质提取和纯化出来。这两个步骤的成功与否直接影响着后续的药物开发和产业化生产。本文将讨论蛋白质表达与纯化的技术原理和方法。

一、蛋白质表达

1.外源表达系统选择

为了获得大量的目标蛋白质，常常需要将其基因导入到适合表达的宿主细胞中。常用的外源表达系统包括细菌、酵母和哺乳动物细胞等。

细菌表达系统：如大肠杆菌（E.coli），具有操作简单、生长速度快的优点。但也存在蛋白质易降解、无法形成复杂的翻译后修饰等缺点。

酵母表达系统：如酵母菌（Saccharomycescerevisiae），能实现某些复杂的翻译后修饰，适合一些较为复杂的蛋白质表达。

哺乳动物细胞表达系统：如CHO细胞（Chinesehamsterovarycells），能够实现广泛的翻译后修饰，蛋白质与人体源性较为接近。但该系统操作复杂、生长周期长、成本高。

2.表达载体构建

表达载体是将目标基因导入到宿主细胞中的工具。常见的表达载体包括质粒和病毒载体。

质粒：是环状的DNA分子，能够在细胞内自主复制和传递基因。常用的质粒包括pUC、p