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JJF1817—2020
1
核酸分析仪校准规范
1范围
本规范适用于基于凝胶电泳原理对核酸片段的长度和浓度进行分析的核酸分析仪的校准,适用的核酸片段的长度范围为(100~1000)bp,对于超出此片段长度范围的核酸分析仪的校准,可参照本规范执行。本规范不适用于平板电泳仪和遗传分析仪的校准。
2引用文件
本规范引用了下列文件:
JJF1265—2010生物计量术语及定义
凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本规范;凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本规范。
3术语和计量单位
3.1片段长度fragmentlength
表示核酸片段的大小,以核苷酸数目(nt)或碱基对数目(bp)为单位。3.2碱基对(bp)basepair
核酸中两条链间的配对碱基。如腺嘌呤-胸腺嘧啶(A-T)对、腺嘌呤-尿嘧啶(A-U)、鸟嘌呤-胞嘧啶(G-C)对、鸟嘌呤-尿嘧啶(G-U)对等。碱基对数目是表征DNA或双链RNA的长度。
[JJF1265—2010,4.41]
4概述
核酸分析仪(以下简称分析仪)是基于凝胶电泳技术原理,将不同大小的双链核酸片段进行分离,在荧光染料存在的条件下,荧光染料嵌入双链核酸中发出荧光,对荧光信号进行检测分析的仪器,可根据各核酸片段的电泳时间和荧光信号值进行定性、定量分析。分析仪通常由进样器、毛细管/微芯片、荧光检测光学部件、微电路控制部件、计算机及应用软件组成,可用于单个和多重PCR片段、限制性内切酶消化的DNA等片段长度和浓度的分析。
5计量特性
5.1示值误差
片段长度示值误差和片段浓度示值误差。
5.2重复性
JJF1817—2020
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片段长度重复性和片段浓度重复性。
5.3片段浓度线性
6校准条件
6.1环境条件
实验室环境应当满足分析仪安装的要求,不得存在强烈的机械振动和电磁干扰,校准时实验室温度应当控制在(15~30)℃,相对湿度不大于80%,并确保校准过程中环境温度变化小于3℃。
6.2校准用标准物质和校准设备
6.2.1标准物质
应采用国内外有证标准物质,如DNA片段标准物质,片段浓度≥40ng/μL,相对扩展不确定度≤5%(k=2),片段长度范围(100~1000)bp。
6.2.2校准用试剂和溶液
按照附录A配制校准用试剂和标准溶液。根据被校准仪器型号选择配套的试剂盒。校准用标准物质保存在-20℃,配套试剂盒保存在4℃。
6.2.3移液器
量程范围(1~10)μL、(10~100)μL,经检定合格。
7校准项目和校准方法
校准前将低温保存的标准物质及配套试剂提前拿出冰箱,平衡30min后按照附录A配制及使用标准溶液。打开仪器,预热10min。
7.1示值误差
7.1.1校准板的准备
参照试剂盒说明书,用移液器将示值误差校准用标准溶液加入到校准板中。若校准板为3×4孔的芯片模式,按照表1所示准备校准板;若校准板为12联排管模式,按照表2所示准备校准板;其他模式的校准板可参照表1和表2准备,空白用一级水代替标准溶液。
表1校准板为3×4孔的芯片模式时的加样排布
孔号
样品
1~3
标准溶液
标准溶液
标准溶液
4~6
标准溶液
标准溶液
标准溶液
7~9
标准溶液
标准溶液
标准溶液
10~12
标准溶液
空白
空白
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表2校准板为12联排管模式时的加样排布
孔号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
样品
标准
溶液
标准
溶液
标准
溶液
标准
溶液
标准
溶液
标准
溶液
标准
溶液
标准溶液
标准溶液
标准溶液
空白
片段长度标准品
注:片断长度标准品为配套试剂盒内的长度标准品。
7.1.2片段长度示值误差
参照仪器说明书,将准备好的校准板置于分析仪内进行测量。记录10次片段长度测定值,按式(1)计算片段长度示值误差。
ΔCbp=Cbp-Cbps
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