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牛血清促细胞生长检查SOP
目的：
规范牛血清促细胞生长检查的检验操作程序，确保检验结果的准确有效。
2.适用范围：
2.1本标准规定了本公司原材料牛血清促细胞生长检查的SOP。
2.2本标准适用于本公司原材料牛血清促细胞生长检验。
3.职责：
3.1检验人员：严格按照本SOP进行检定，并完成与本SOP相关的记录。
3.2检定组长：按照本SOP组织相关人员进行培训，并监督实施。
3.3质量控制室主任：负责对本SOP的实施进行管理。
4.材料：
4.1供试品：新生牛血清
4.2器具：1ml、10ml刻度吸管，T25细胞培养瓶，96孔培养板，细胞计数板，盖玻片
4.3试剂及检定细胞：高糖DMEM培养基，对照血清（已检测合格的牛血清）,SP2/0细胞
4.4仪器与设备：CO2培养箱、倒置显微镜，超净工作台
5.内容
5.1操作步骤：
5.1.1取供试品牛血清和对照血清，分别配制含有10%供试品牛血清和对照血清的培养基。
5.1.2复苏SP2/0细胞，用含有10%对照血清的培养基在T25瓶中培养。待其状态良好时，分别用对照牛血清及供试品继续适应性传代，每三天传一代，至少连传三次。
5.1.3取对数生长期的细胞用于试验。弃去T25瓶中的培养基，加入5mlDMEM培养基，用吸管吹打，将SP2/0细胞制成每1ml含104个活细胞的浓度，接种到96孔培养板中，每批供试品16孔，每孔0.2ml，置37℃5%CO2培养箱培养，同时做阴性对照。从第3天起，供试品和阴性对照每天取1孔进行细胞计数，连续计数一周。
5.2结果计算
5.2.1细胞生长曲线的测定：
将计数一周的细胞绘制成生长曲线。
5.2.2细胞倍增时间的测定：
取细胞峰值前一天的细胞计数（Y）、接种细胞数（X）及生长时间（T）计算。
倍增时间＝T/AA=log2Y/X
5.3结果判断：
细胞最大增殖浓度应不低于106/ml；
细胞倍增时间应不超过20小时。
健康、安全与环境：
6.1N/A
7.注意事项：
7.1N/A
8.术语：
8.1SP2/0细胞：骨髓瘤细胞
9.引用标准：
9.1《中华人民共和国药典》2015年版三部。
10.引用文件：
10.1N/A
派生三级文件：
F（SOP-XXXX）01《牛血清促细胞生长检查记录》
12.附录：
12.1N/A
13．变更记载：
修订号
生效日期
制定（变更）原因
00
2012.03.15
完善文件体系
01
引用标准升级
02
03
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