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汇报人：AA

2024-01-25

1基因工程的基本概念汇总

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Contents

目录

基因工程概述

基因工程基本原理

基因工程操作技术

基因工程载体系统

基因工程在医学领域应用

基因工程在农业领域应用

基因工程在工业生产领域应用

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基因工程概述

基因工程是通过对生物体基因进行改造和重组，以达到改良生物性状、生产有用物质等目的的一门技术。

自20世纪70年代基因工程诞生以来，随着DNA重组技术、基因编辑技术等的发展，基因工程在农业、医学、工业等领域的应用不断拓展。

基因工程发展

基因工程定义

农业领域

通过基因工程改良作物和畜禽品种，提高产量和品质，增强抗逆性，减少农药和化肥使用等。

医学领域

基因工程在医学领域的应用包括基因诊断、基因治疗、生物制药等，为疾病的预防和治疗提供了新的手段。

工业领域

利用基因工程生产工业用酶、生物燃料、生物塑料等，推动工业生产的绿色化和可持续发展。

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基因工程基本原理

限制性内切酶切割DNA

利用限制性内切酶识别并切割DNA分子中的特定序列，产生黏性末端或平末端。

DNA连接酶连接DNA片段

将具有相同黏性末端或平末端的DNA片段在DNA连接酶的作用下连接起来，形成重组DNA分子。

转化、转导和感染实现重组DNA分子的转移

通过转化、转导或感染等方式将重组DNA分子导入受体细胞，实现基因转移。

通过操纵子模型、阻遏蛋白和激活蛋白等调控因子对基因表达的调控。

原核生物基因表达调控

包括转录水平调控（如启动子、增强子等）、转录后水平调控（如RNA剪接、加工等）和翻译水平调控（如蛋白质磷酸化、糖基化等）。

真核生物基因表达调控

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重组克隆载体的筛选与鉴定

通过蓝白斑筛选、PCR鉴定等方法对重组克隆载体进行筛选和鉴定，确保目的基因的正确插入。

01

PCR技术扩增目的基因

利用PCR技术，在特定引物的引导下，通过DNA聚合酶的作用，将目的基因进行快速、特异的扩增。

02

基因克隆载体的构建

将目的基因与克隆载体（如质粒、噬菌体等）进行连接，构建成重组克隆载体。

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基因工程操作技术

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利用酚和氯仿的有机溶剂特性，将DNA从细胞裂解液中分离出来，并通过乙醇沉淀进行纯化。

酚/氯仿抽提法

采用商业化的DNA提取试剂盒，通过特定的缓冲液和吸附柱，实现DNA的快速提取和纯化。

试剂盒法

利用氯化铯（CsCl）在溶液中形成的密度梯度，将DNA分子按照大小进行分离纯化。

CsCl密度梯度离心法

限制性内切酶酶切

在DNA片段的黏性末端或平末端之间，利用DNA连接酶催化形成磷酸二酯键，实现DNA片段的连接。

DNA连接酶连接

同源重组技术

利用细胞内源的同源重组机制，将外源DNA片段整合到基因组中特定位置。

利用限制性内切酶识别特定的DNA序列，并在该序列上进行切割，产生黏性末端或平末端。

感受态细胞转化

脂质体转染

电穿孔转染

病毒介导的转染

通过特定的处理方法使细菌细胞处于易于接受外源DNA的状态，然后将DNA导入感受态细胞中实现转化。

通过高压电脉冲在细胞膜上形成短暂的孔洞，使DNA能够进入细胞内。

利用脂质体作为载体，将DNA包裹在其中，通过与细胞膜的融合将DNA导入细胞内。

利用病毒载体将外源DNA包装成病毒颗粒，然后感染细胞实现转染。

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基因工程载体系统

噬菌体是一种专门寄生在细菌细胞内的病毒，由蛋白质外壳和内部核酸组成。

噬菌体的定义

噬菌体载体的特点

噬菌体载体的应用

噬菌体载体具有宿主范围广、转染效率高、能容纳较大的外源DNA片段等优点。

噬菌体载体常用于基因文库构建、基因功能研究、基因治疗等领域。

03

02

01

病毒是一种只能在活细胞内寄生并以复制方式增殖的非细胞型生物。

病毒的定义

病毒载体具有转染效率高、能整合到宿主细胞基因组中、表达稳定等优点。

病毒载体的特点

病毒载体广泛应用于基因治疗、基因疫苗研制、基因功能研究等领域。其中，逆转录病毒载体和腺病毒载体是最常用的病毒载体之一。

病毒载体的应用

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基因工程在医学领域应用

基因诊断

利用基因工程技术，通过检测特定基因或基因突变来诊断疾病。例如，通过PCR技术扩增特定基因片段，再利用测序或杂交等方法进行检测。

基因治疗

通过导入正常基因或修复突变基因，达到治疗疾病的目的。例如，利用病毒载体将正常基因导入患者体内，以替代或修复缺陷基因。

精准医疗

基于个体差异的精准诊断和治疗，通过基因工程技术实现个体化医疗。例如，根据患者的基因组信息，制定针对性的治疗方案。

利用基因工程技术改造T细胞，使其表达能够识别肿瘤细胞的嵌合抗原受体（CAR），从而实现对肿瘤细胞的特异性杀伤。

CAR-T细胞疗法

通过基因工程技术将具有特异性识别肿瘤细胞的T细胞受体（TCR）导入T细胞，增强其对肿瘤细胞的识别和杀伤能力。