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网织红细胞计数标准操作程序
1方法
试管染色法。
2原理
网织红细胞是尚未完全成熟的红细胞,其胞浆内尚存在有嗜碱性的RNA物质,经煌焦油蓝或新
亚甲蓝活体染色后呈浅蓝色或深蓝色的网状结构。网织颗粒越多,表示红细胞越未成熟。
3试剂
网织红细胞染色液:
3.1品牌:珠海贝索生物技术有限公司(BASOdiagnostic,Inc)
3.2包装规格:2瓶×100ml
3.3主要成份:新亚甲蓝
3.4储存条件:室温(15℃~30℃),相对湿度不大于80%,无腐蚀性气体和痛风良好的室内保存。
3.5使用期限:2年(开瓶后效期为6个月)。
3.6注意事项:避免高、低温环境及阳光直射。
4实验器材
显微镜、滴管、载玻片、推片、香柏油、擦镜纸、乳胶手套、试管架、移液器等。
5标本要求
5.1标本必须为末梢血或EDTA-K抗凝的静脉血。静脉采血后立即与抗凝剂混匀,放置室温立即送检。
2
5.2标本在室温下最多保留4小时。不能在4小时内检测的标本,放置于冷藏冰箱(2℃~8℃)中
保存,8小时内标本有效,使用前从冰箱中取出回复室温后检测。
6操作步骤
6.1于0.5ml试管内加入20l网织红细胞染色液。
6.2取血液20l,加入试管内,混匀,盖紧盖子,并标记相应标本号。
6.3静置20分钟或更久。
6.4推成薄片2张,待干。
6.5在油镜下选择红细胞分布均匀,染色较好部位,每张片子检查1000个红细胞中网织红细胞数,
算出百分率,以均值报告。
7计算
1000个红细胞中网织红细胞的数目
网织红细胞数(%)=×100
1000
如:玻片1:
油镜下计数1000个红细胞时见10个网织红细胞,则网织红细胞的相对比值为:
10
网织红细胞数(%)=×100=1.0%
11000
玻片2:
油镜下计数1000个红细胞时见12个网织红细胞,则网织红细胞的相对比值为:
12
网织红细胞数(%)=×100=1.2%
21000
1.0%+1.2%
最终,网织红细胞数(%)=×100=1.0%
2
8参考范围
0.5%-1.5%
9临床意义
网织红细胞的多少可反映骨髓造血功能的情况。
9.1增加:表示骨髓造血功能旺盛,各种贫血均可增多,溶血性贫血增加尤其显著,恶性贫血或缺
铁性贫血应用维生素B或铁剂治疗后显著增多,提示治疗有效。
12
9.2减少:表示骨髓造血功能减退。常见于再生障碍性贫血。
10注意事项
10.1活体染色时间不能过短。
10.2涂片要薄而均匀,红细胞不能重叠,染色良好的涂片中可见嗜多色性略带蓝色红细胞,其中
可以看到深蓝色的颗粒或网状物质为网织红细胞。
10.3用瑞氏-姬姆萨染液复染后可使网织红细胞计数结果减少。
10.4为方便计数,可于目镜中放一中间有孔之硬纸片,缩小视野,便于计数。
10.5最好制片2张,每张计数1000个红细胞,误差不能超过10%或±0.3%,取两者均值报告结
果,避免分布不均引起的误差。
10.6网织红细胞目视计数误差较大,所造成不精密和不准确的因素有操作人员对网织红细胞的认识
不同;血涂片的质量;计数红细胞数目的多少;方法不同计数结果的误差也不一样等。Brecler等
证明Miller窥盘可以减低被测网织红细胞的标准误,特别是在网织红细胞数目较少的时候。ICSH
推荐的网织红细胞活体染色显微镜计数法。
11结果的报告
将计算得到的网织红细胞相对比值手工输
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