分析化学实验报告1. 双缩脲法-2013-0910-ST.docxVIP

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实验一蛋白质的含量测定-双缩脲法

实验目的：掌握双缩脲法测定蛋白浓度的原理及方法。

二．实验原理

1.双缩脲反应:

在碱性溶液中，双缩脲(H2N-OC-NH-CO-NH2)与CuSO4作用形成紫红色的络合物，在540nm处有最大吸收，这一反应称为“双缩脲反应”。凡具有两个或两个以上的肽键(-CO-NH-)的化合物都呈双缩脲反应。蛋白质分子中因含有很多的肽键，故所有蛋白质都有双缩脲反应。在一定的浓度范围内，生成的颜色深浅与蛋白质含量成正比，因此可用作蛋白质定量测定。

由于参与反应的是蛋白质的肽链结构，与组成蛋白质分子肽链氨基酸残基的侧链功能关系较少。因此，不同蛋白质的双缩脲反应基本相似。

2.分类:

常量法：测定蛋白质浓度范围：1∽10mg/ml,选用540nm比色测定。

微量法：选在310∽330nm检测，灵敏度比540nm检测高10倍。

优点:①利用双缩脲反应生成有色物质用作蛋白质的比色测定受蛋白质种类影响较小,是优点之一。

②试剂和操作的简单、迅速也是其优点。

缺点:灵敏度较差，仅适用于蛋白质浓度在0.5mg/ml以上的样品测定。Tris缓冲液、类脂、色素、一些氨基酸等会干扰此测定。

3.本实验原理:

本实验选用面粉作为测试样品，测定面粉中的蛋白质含量。

三．试剂和器材

1．测试样品：面粉。

2．试剂：

标准蛋白质溶液