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志贺氏菌多克隆抗体制备及ELISA检测方法的建立的综述报告

志贺氏菌是引起腹泻疾病的病原体之一，以其高度的毒力和传染性在世界范围内引起了广泛的关注。为了研究志贺氏菌的分布、传染途径、致病机理以及预防措施等方面的问题，对志贺氏菌的检测方法进行深入研究至关重要。本文将重点介绍志贺氏菌多克隆抗体的制备及其在ELISA检测方法中的应用。

一、志贺氏菌多克隆抗体制备

1.抗原制备

志贺氏菌是一种革兰氏阴性杆菌，其外层膜蛋白、内毒素以及O抗原均是抗原表位。因此，制备志贺氏菌多克隆抗体的第一步是制备抗原。

抗原制备通常采用培养菌株并收集细胞。常用的培养基包括MacConkey琼脂、Luria-Bertani培养基、BrainHeartInfusion培养基等。培养温度为37℃，常规条件下培养至菌量达到对数生长期后，收集干细胞后冷冻，待用。

2.免疫原制备

将收集的干细胞经脱细胞后，获得的包含O抗原、外膜蛋白及其它重要抗原的物质即为免疫原。

3.动物免疫及抗血清制备

多种动物均可用于制备克隆抗体，其中以小鼠和兔为常用。将免疫原与两者之一的生理盐水混合，制备含有一定免疫原浓度的混合物，注射小鼠或兔腹腔或肌肉内，以免疫小鼠或兔。重复注射三次，每次间隔2周。最后采集小鼠或兔血清制备成抗血清。

4.抗原特异性检验

通过ELISA等方法，对制备的抗血清进行特异性检验，筛选出能够纯化志贺氏菌的克隆抗体。

二、ELISA检测方法的建立

ELISA是一种基于酶促反应的生化检测方法，也是检测志贺氏菌最常用的方法之一。已制备的抗血清可用于ELISA检测方法的建立。

1.ELISA检测方法所需试剂

ELISA检测所需的试剂包括ELISA板、抗体、酶标记的抗体、显色底物和停止液等。

2.ELISA检测方法的操作步骤

ELISA检测的操作步骤如下：

（1）将制备好的抗原溶液均匀涂布于ELISA板上，孵育30分钟至过夜。将ELISA板洗净。

（2）将非特异性点试加入板孔，封孔孵育30分钟，以免板面非特异性结合。

（3）加入待测样本、免疫球蛋白、酶标记二抗混合物，孵育1小时。将ELISA板洗净。

（4）加入显示反应酶，孵育30-60分钟。将ELISA板洗净。

（5）加入显色底物，在暗处反应15-30分钟。加入停止液，反应结束。

（6）读板，计算样品中志贺氏菌含量。

三、结论

本文介绍了志贺氏菌多克隆抗体制备及ELISA检测方法的建立。之所以选用多克隆抗体是因为其具有多种抗原表位的识别能力，可提高检测的特异性和敏感性。ELISA检测方法的优点是操作简单、灵敏度高、重复性好，已被广泛应用于志贺氏菌的检测。制备和应用多克隆抗体及ELISA检测方法将为志贺氏菌的研究提供重要的技术支持。