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根癌农杆菌介导的盾叶薯蓣转化体系的建立的综述报告

引言

盾叶薯蓣（Dioscoreazingiberensis），是一种中国传统的药用植物，具有多种药用价值，如改善血液循环、预防心脑血管疾病等。然而，盾叶薯蓣的种植和生产存在很多困难，例如病虫害、低产等问题。因此，转化育种技术的应用对盾叶薯蓣的产业化生产和开发利用具有重要意义。本文综述了根癌农杆菌介导的盾叶薯蓣转化体系的建立。

一、盾叶薯蓣的转化育种技术

转化是把外源基因导入到生物体细胞的过程，转化育种技术是目前应用最广泛的载体基因转移技术。核酸基因转移技术的基本过程包括：制备重组DNA、构建重组载体、导入目的细胞、细胞遗传转化、筛选转化细胞等步骤。利用转化技术处理的产品称之为转基因生物或转基因植物。

在盾叶薯蓣转化育种技术中，根癌农杆菌介导的盾叶薯蓣转化是目前最常用的转化方法。根癌农杆菌是一种自然存在于土壤中的植物病原菌，能够传递DNA片段到宿主植物的细胞中。利用根癌农杆菌的农杆菌介导转化方法，可以将目的DNA片段导入到盾叶薯蓣的细胞中，从而实现基因转移。

二、根癌农杆菌介导的盾叶薯蓣转化体系的建立

盾叶薯蓣作为非模式植物，其转化体系建立较为困难。因此，为了建立高效的盾叶薯蓣转化体系，需要进行一系列开发性研究。

1.外源DNA传递方法的改进

外源DNA传递方法对于盾叶薯蓣的转化效率和转化质量具有重要影响。通过对转化条件进行优化，可以提高目的基因在盾叶薯蓣中的表达水平和转化频率。例如，处理植物组织以生长素和生长素类的物质，能够增加细胞壁透性和对根癌农杆菌感染的敏感度，进而提高转化效率。

2.杀菌剂的筛选

盾叶薯蓣在生长过程中容易受到杂菌和土壤真菌的感染，而盾叶薯蓣转化体系需要用到大量的杀菌剂，也容易对盾叶薯蓣的生长产生负面影响。因此，在杀菌剂选择方面，需要考虑对盾叶薯蓣不会造成不良影响的杀菌剂。

3.抗生素筛选标准的确定

在根癌农杆菌介导的盾叶薯蓣转化中，通过选择适当的抗生素，可以筛选出转化成功的植株，从而将基因表达到稳定的转化植株中。然而，对于盾叶薯蓣的抗生素选择方面尚缺乏规范标准，需要综合考虑保留盾叶薯蓣的正常生长和发育，以及对于细菌抗性的选择敏感度。

4.适宜的转化间隔

在盾叶薯蓣转化体系中，适宜的转化间隔对于保证转化质量和转化效率非常重要。太短的间隔时间会导致真菌和杂草等容易攻击植株，而太长的转化间隔时间，则会影响经济效益和转化效率。因此，需要在实验中针对不同间隔时间进行多次实验，确定最适宜的转化间隔时间。

5.基因导入后的表达

根癌农杆菌介导的盾叶薯蓣转化成功后，需要检测基因是否能够高效表达。通过该方法，一些专门的基因不仅可以表达出来，而且可以在盾叶薯蓣的组织中高效表达。同时，还需要检测目的基因的表达位置，以便为后续选优转化植株和保留基因提供科学依据。

结论

根癌农杆菌介导的盾叶薯蓣转化体系建立难度较高，需要进行一系列开发性研究来优化传递方法、筛选适宜杀菌剂、筛选适宜的抗生素标准、确定适宜的转化间隔和检测基因导入后的表达等。这些方面的研究不仅为盾叶薯蓣转化育种提供了科学依据，而且也有利于开发新的转基因产品，为植物育种的发展做出贡献。