茄科作物重要类病毒检测鉴定方法.pdfVIP

茄科作物重要类病毒分子生物学检测方法

1范围

本文件规定了茄科作物重要类病毒（马铃薯纺锤块茎类病毒、金鱼花潜隐类病毒、辣椒小果类病毒、

番茄褪绿矮缩类病毒）的RT-PCR和实时荧光PCR检测方法。

本文件适用于茄科植物材料及种子中重要类病毒（马铃薯纺锤块茎类病毒、金鱼花潜隐类病毒、辣

椒小果类病毒、番茄褪绿矮缩类病毒）的分子生物学检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T27402实验室质量控制规范植物检疫

SN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样规则

GB18133马铃薯种薯

GB/T36857引进马铃薯种质资源检验检疫操作规程

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4茄科作物重要类病毒分类信息

中文名：马铃薯纺锤块茎类病毒

学名：potatospindletuberviroid

缩写：PSTVd

异名：potatogothicvirus、potatospindleviroid、spindletuberviroid、tomatobunchytopviroid

分类地位：马铃薯纺锤块茎类病毒科（Pospiviroidae）、马铃薯纺锤块茎类病毒属（Pospiviroid）。

马铃薯纺锤块茎类病毒的其它信息参见附录A。

中文名：金鱼花潜隐类病毒

学名：Columnealatentviroid

缩写：CLVd

分类地位：马铃薯纺锤块茎类病毒科（Pospiviroidae）、马铃薯纺锤块茎类病毒属（Pospiviroid）。

金鱼花潜隐类病毒的其它信息参见附录B。

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中文名：辣椒小果类病毒

学名：pepperchatfruitviroid

缩写：PCFVd

分类地位：马铃薯纺锤块茎类病毒科（Pospiviroidae）、马铃薯纺锤块茎类病毒属（Pospiviroid）。

辣椒小果类病毒的其它信息参见附录C。

中文名：番茄褪绿矮缩类病毒

学名：tomatochloroticdwarfviroid

缩写：TCDVd

分类地位：马铃薯纺锤块茎类病毒科（Pospiviroidae）、马铃薯纺锤块茎类病毒属（Pospiviroid）。

番茄褪绿矮缩类病毒的其它信息参见附录D。

5方法原理

马铃薯纺锤块茎类病毒、金鱼花潜隐类病毒、辣椒小果类病毒、番茄褪绿矮缩类病毒的基因组特征

是该类病毒检疫鉴定的依据。根据马铃薯纺锤块茎类病毒、金鱼花潜隐类病毒、辣椒小果类病毒、番茄

褪绿矮缩类病毒的基因组特征建立RT-PCR和荧光RT-PCR检测方法；通过这些方法的有效组合，判断样

品是否带有马铃薯纺锤块茎类病毒、金鱼花潜隐类病毒、辣椒小果类病毒或番茄褪绿矮缩类病毒。

6试剂、仪器设备及用具

6.1试剂

除另有规定外，所有试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T6682中相关规定。

RT-PCR试剂应符合附录E中的E.1；

荧光RT-PCR试剂应符合附录F中的F.1。

6.2仪器设备

高速冷冻离心机、电子天平、PCR仪、荧光PCR仪、水平电泳系统、-20℃低温冰箱和-80℃超低温

冰箱、凝胶成像分析系统、pH计、微波炉、磁力搅拌器、恒温水浴锅、高压灭菌锅等。

6.3用具

可调移液器（2.5μL，10μL，20μL，100μL，200μL，1000μL）、移液器吸头、1.5mL离心管、

研钵等。

7样品准备

7.1植物材料制样

待测样品为植物材料（小苗或叶片或果实或块茎）时，挑选有疑似症状的部位单独取样编号，症状

描述见附录A、B、C、D；未表现症状的植物材料分组（2-3份植物材料为1组）编号，采集的每组样品

进行混合。