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实验五荧光显微镜的使用和细胞的荧光染色

【实验目的】

掌握荧光显微镜的原理和使用;

掌握生物材料荧光染色的原理和应用。

■=j最【实验原理】吖啶橙（acridineorange，AO）是最经典的极灵敏的荧光染料，它可对细胞中的DNA和RNA同时染色而显示不同颜色的荧光。其激发峰为492nm，荧光发射峰为530nm（DNA）、640（RNA），它与双链DNA的结合方式是嵌入双链之间，而与单链DNA和RNA

■=j

最

在蓝光（502nm）激发下，细胞核发亮绿色荧光（约530nm），核仁和胞质RNA发橘红色荧光（＞580nm）。吖啶橙的阳离子也可以结合在蛋白质、多糖和膜上而发荧光，但细胞固定阻抑了这种结合，从而主要显示DNA、

RNA两种核酸。

【实验用品】

1、 器材

荧光显微镜、牙签、载玻片、盖玻片、滴管、吸水纸。

2、 试剂

（1）0.1mol/lpH7.0PBS液

A液：NaH2PO4?H2O2.76g，加蒸馏水至100ml；

B液：Na2HPO4?7H2O5.36g，加蒸馏水至100ml；

取A液16?5ml+B液33.5ml+NaCl8.5g,用蒸馏水稀释至100ml。

（2）1%吖啶橙原液取0.1g吖啶橙加蒸馏水稀释至100ml（临用时配制0.01%吖啶橙染液：将

1%吖啶橙原液用pH7.0PBS溶液稀释10倍）。

3、材