高二生物寒假讲义练习（选择性必修3）第07讲 重组DNA技术的基本工具（学生卷）.pdfVIP

07DNA

第讲重组技术的基本工具

【学习目标】

1.阐明重组DNA技术所需的三种工具的作用。

2.提升对基因工程的理解能力，能够合理分析在基因水平产生的问题。

3.了解进行DNA的粗提取和鉴定的原理，进行DNA的粗提取和鉴定的操作。

3.认同基因工程的作用及意义，认识到生物技术的发展离不开理论研究和技术创新。

【基础知识】

一、基因工程的概念

项目具体内容

操作对象基因

原理基因重组

操作环境体外

操作水平分子水平

结果获得人们需要的新的生物类型和生物产品

优点克服远缘杂交不亲和的障碍;定向改造生物的性状

二、限制性核酸内切酶

（）来源：主要从原核生物中分离出来。

1

（）种类：约种

24000

（）作用识别双链分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷

3:DNA

酸二酯键断开。

（）限制酶识别序列的长度最常见的为个核苷酸，也有少数限制酶的识别序列由个、个、或其他数

4648

量的核苷酸组成。

①在中轴线两侧切割，形成黏性末端。如：限制酶能识别序列，为个核苷酸，并在和

EcoRIGAATTC6G

A之间切开。

②在中轴线处切割，形成平末端。如：限制酶能识别序列，为个核苷酸，并在和之

SmaICCCGGG6GC

间切开。

总结归纳

1.限制性核酸内切酶是可以识别并附着特定的核苷酸序列，并对每条链中特定部位的两个脱氧核糖核苷酸之

间的磷酸二酯键进行切割的一类酶，简称限制酶。

2.限制作用实际就是限制酶降解外源DNA，维护宿主遗传稳定的保护机制。一般不切割自身的DNA分子，

是由于甲基化的修饰作用，可使腺嘌呤和胞嘧啶甲基化而受到保护，通过甲基化作用达到识别自身遗

AC

传物质和外来遗传物质的目的。

根据酶的功能特性、大小及反应时所需的辅助因子，限制性内切酶可分为两大类，即类酶和类酶。

3.IⅡ

其中，类酶有、、、等，在所识别的特定碱基序列上有特定的酶切位点，因

ⅡEcoRIBamHIHindⅡHindⅢ

而分子经过类酶作用后，可产生特异性的酶解片断，这些片断可用凝胶电泳法进行分离、鉴别。

DNAⅡ

限制酶识别序列中的回文序列。回文序列指的是双链或分子中的特定的核苷酸片段，该

4.DNADNARNA

片段在其中一条链上按到读取的序列与其互补链上按相同的到读取的序列一致。例如，序列

5353DNA

ACCTAGGT之所以是回文序列，是因为它的互补序列是TGGATCCA，而反向互补序列是ACCTAGGT，

和其原来序列一致。有些限制酶的切割位点在回文的一侧（如、、等），因而可形成粘