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常见细菌感染PCR鉴定流程

一、 细菌核酸的提取

取1ml培养肉汤13000g离心10min弃去上清。

用1ml蒸馏水洗涤细胞沉淀后再次13000g离心10min弃去上清。

取200ulInstaGeneMatrix（Bio-Rad）重悬细胞颗粒。

（注）：采用平板培养时挑取单个菌落直接用200ulInstaGeneMatrix（Bio-Rad）混匀后从第4步开始。

4.56^温育30min后剧烈振荡10s。

5.95^温育1min后剧烈振荡10s。

6.13000g离心10min,上清即可用于PCR。

二、 PCR反应液的配置

TakaraTaq酶（目录号：DR001A）,包装内含有10XPCRbuffer（已添加镁离子）、dNTPMixture及6XLoadingBuffer。

1X反应体系

核酸模板

5ul

Taq酶

0.5ul

10XBuffer

5ul

dNTPMixture

4ul

上游引物（20uM）

1ul

下游引物（20uM）

1ul

火菌去离子水

33.5ul

共计

50ul

三、扩增引物和反应条件

检测项目

引物名称

引物序列

反应条件

产物大小

沙门菌属

上游引物

5-GTGAAATTATCGCCACGTTCGGGCAA-3

94°C5min,

38个循环(94