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检验科作业指导
乙肝五项检测卡(胶体金法)
【标本的采取和保存】
采静脉血2ml,分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜,无污染,避免溶血,避免反复冻融,不可用NaN3防腐【检验原理】
乙肝五项检测卡(胶体金法)采用胶体金免疫层析技术,将五个诊断意义相关的试剂通过一个包装组合在一起,同时进行乙型肝炎病毒五项标志物的检测,在不影响各自性能的情况下,便于客户的储存和使用。
HBsAg金标试条利用双抗体夹心法原理,在玻璃纤维素膜上预包被金标鼠抗HBsAg单抗(AU-SAbI),在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被鼠抗HBsAg单抗(sAb2)和羊抗鼠IgG。检测阳性样本时,样本中HBsAg与胶体全标记抗体结合形成复合物,在层析作用下复合物沿膜带向前移动,经过检测线时与预包被的抗体结合形成Au-sAbl-HBsAg-sAb2夹心物而凝聚显色,游离金标抗体则在对照线处与羊抗鼠IgG结合而富集显色。阴性样本则仅在对照线处显色。
HBsAb金标试条利用双抗原夹心法原理,在玻璃纤维纸上预包被金标表面抗原(重组抗原)(Au-SAg),在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被(重组抗原)HBsAg和羊抗HBsAg。检测阳性样本时,样本中HBsAb与胶体全标记表面抗原结合形成复合物,在层析作用下复合物沿膜带向前移动,经过检测线时与预包破的表面抗原结合形成Au-sAg-HBsAb-sAg夹心物而凝聚显色,游离金标抗原则在对照线
处与羊抗HBsAg结合而富集显色。阴性样本则仅在对照线处显色。
HBeAg金标试条利用双抗体夹心法原理,在玻璃纤雄素膜上预包被金标鼠抗HBeAg单抗(Au-eAbl),在硝酸纤维素膜上的检测线和对照线处分别包被鼠抗e单抗(eAb2)和羊抗鼠IgG。检测时,样本中的eAg可与胶体金标记抗体结合形成免疫复合物,在层析作用下复台物沿膜带移动,经过检测线时与预包被的抗体形成Ab2-eAg-eAbl-Au”夹心物而凝聚显色;阴性样本仅在对照线处显色。
HBeAb金标试条是采用竞争法,在玻璃纤维素膜上预包被e抗原(大肠杆菌表达)及金标鼠抗Au-eAb2,在硝酸纤维素膜上的检测线包被鼠抗e单抗(eAbi),在对照线包被羊抗鼠IgG。检测时,样本中的eAb可与e抗原及金标抗体一eAb2-Au结合,形成免疫复合物,在层析作用下复合物沿膜带移动,经过检测线时,金标记的eAb2-Au不能与检测线结合,则只在对照线处形成一条色带。如为阴性样本,则在检测线处形成夹心物Abl-eAg-eAb2-Au”而凝聚显色。
HBcAb金标试条是采用竞争法,在玻璃纤维素膜上预包被金标记重组核心抗原(大肠杆菌表达}(CAg);在硝酸纤雒素膜上的检测线和对照线处分别包被鼠抗核心单抗(CAbI)和羊抗重组核心抗原。检测时,样本中的CAb与检测线处包被的鼠抗CAbl竞争的结合金标记核心抗原CAgo如为阳性样本,金标记的CAg不能与检测线处鼠抗CAbI结合,则检测线处不出现任何可见条带。如为阴性样本,则金标记的CAg与检测线处鼠抗CAbl结合形成一条色带。金标记的CAg可以在对照线处被羊抗重组核心抗原铺获而形成一条色带。
【检验方法】
在使用前请仔细阅读本说明书,并严格按照本说明书执行,以保证测试结果的准确性。
1,将待测样品从储存条件下取出,平衡至室温(18-25Q并编号;
2将所需数的试卡从包装盒中取出,打开铝箔包装袋将试卡取出平放于台面,编号(与样品相对应);
3.用加样枪在试卡的五个加样孔中分别加入60uL血清(浆),或用所配吸管在每个加样孔中滴入三滴;
4,加样20分钟后最终观察并判断结果,30分钟后试验结果无效。
【检验结果的解释】
HBsAgHBsAb?HBeAg
阳性:在检测线及对照线各出现一条紫红色反应线。
阴性:仅在对照线出现一条紫红色反应线。
无效:试卡无紫红色反应线出现,或仅在检测线出现一条反应线,表明实验失败或测试卡失效,请用新的检卡重新测试。如果问题仍然存在请停止使用本批产品,并与当地经销商联系。
HBeAb、HBcAb
阳性:1.仅在对照线出现一条紫红色反应线。
2?若对照线出现一条紫红色条带,在检测线有非常弱的紫红色条带出现,应判为弱阳性。
阴性:在检测线及对照线各出现一条紫红色反应线。
无效:试卡无紫红色反应线出现,或仅在检测线出现-条反应线,表明实验失败或检测卡失效,请用新的检测卡重新测试。如果问题仍然存在请停止使用本批产品,并与当地经销商联系。
【注意事项】
.检测必须符合实验室管理规范和生物安全守则的规定,操作时必须戴手套、穿工作服、严格健全和执行消毒隔离制度。
.试剂可在室温下保存,谨防受潮。低温下保存的试剂应平衡至室温方可使用。
.实验环境应保持一定湿度,避风。避免在过高温度下进行实验。
.检测线颜色的
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