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单抗制备-细胞融合筛选过程中遇到的问题及对策

1，融合率低，阳性孔少

①免疫的问题。由于免疫原性不强或者免疫途径不当造成免疫弱，效价低。②融合过程中温度、时间、PEG分子量，作用时间等。

①免疫的问题。由于免疫原性不强或者免疫途径不当造成免疫弱，效价低。

②融合过程中温度、时间、PEG分子量，作用时间等。

③脾细胞是否取出了足够多的细胞，有无组织碎片干扰。

④融合前骨髓瘤细胞生长状态是否完好，细胞是否浑圆，透亮，成对数生长。

2，单抗亲和力整体低

①免疫的问题。免疫途径不当或者免疫原问题。②融合细胞筛选过程出现遗漏，筛选方法不当或检测方法不当，造成没有筛到高亲和力的融合细胞。③由于亚克隆细胞生长环境不合适，导致融合细胞染色体丢失，分泌特性改变，亲和力从高变低，这时就需要及时更换培养液，当细胞增长到一定密度的时候，培养基就开始变颜色，影响融合细胞的生长，造成染色体丢失；控制好细胞的密

①免疫的问题。免疫途径不当或者免疫原问题。

②融合细胞筛选过程出现遗漏，筛选方法不当或检测方法不当，造成没有筛到高

亲和力的融合细胞。

③由于亚克隆细胞生长环境不合适，导致融合细胞染色体丢失，分泌特性改变，

亲和力从高变低，这时就需要及时更换培养液，当细胞增长到一定密度的时候，

培养基就开始变颜色，影响融合细胞的生长，造成染色体丢失；控制好细胞的密

度，密度过大使新加入的培养基不至于很快被消耗，影响