实验一培养基的配制.pptVIP

第1页，课件共18页，创作于2023年2月一、实验目的了解植物外植体离体培养所需各种营养成分及激素种类。初步掌握培养基母液配制方法。第2页，课件共18页，创作于2023年2月二、实验原理植物材料培养要获得成功，并正常生长，培养基的成分是一个决定性因素，不同植物要求不同的培养基。大多数植物组织培养所用的培养基由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成。第3页，课件共18页，创作于2023年2月在配制培养基之前，为了使用方便、简化操作、用量准确，减少每次配药称量各种化学成分所花费的时间和误差，常常将配制培养基所需无机大量元素、微量元素、铁盐、有机物、激素成分分别配制成比需要量大若干倍的浓缩母液，置于冰箱内保存。当配制培养基时，按预先计算好的量分别吸取各种母液稀释即可。第4页，课件共18页，创作于2023年2月三、实验材料与器具1、用具器材灭菌锅、普通及精密天平、烧杯、医用瓷缸、量桶、移液管、试剂瓶、药勺、玻璃棒、pH试纸。2、药品试剂蒸馏水、1NHCl、1NNaOH、95%酒精、蔗糖、琼脂、各种所需化学药品（分析纯）。第5页，课件共18页，创作于2023年2月四、实验步骤1、母液配制（1）配制10倍1LMS大量元素母液NH4NO3?16.5gKH2PO41.7gKNO319g??CaCl2·2H2O?4.4gMgSO4·7H2O?3.7g第6页，课件共18页，创作于2023年2月配制成200倍1L母液，依次称取:KI0.166gNa2MoO4·2H2O0.05gH3BO31.24gCuSO4·5H2O?0.005gMnSO4·4H2O?4.46g??CoCl2·6H2O?0.005gZnSO4·7H2O?1.72g（2）配制MS微量元素母液第7页，课件共18页，创作于2023年2月配制成200倍lL铁盐母液，依次称取:EDTA二钠（Na2·EDTA·7H2O）7.46g?FeSO4·7H2O??5.56g（3）配制MS铁盐母液?第8页，课件共18页，创作于2023年2月配制成200倍1L有机母液，依次称取：盐酸硫胺素（VB1）?0.02g烟酸???0.1g??盐酸吡哆醇（VB6）??0.1g（4）配制MS有机母液①第9页，课件共18页，创作于2023年2月（5）配制MS有机母液②配制成200倍1L有机母液：肌醇???20.0g?（6）配制MS有机母液③配制成200倍1L有机母液：甘氨酸???0.4g?第10页，课件共18页，创作于2023年2月0.1mg/mL的6-BA溶液：取25mg的6-BA，用少量1N的盐酸溶解，再加蒸馏水定容至250mL。0.1mg/mLNAA：取25mg的NAA可溶于热水中或用少量95%乙醇或少量1N的NaOH溶解后，再加水定容至250mL。0.1mg/mL2，4-D：取20mg的2，4-D溶于少量95%乙醇中，再加水定容至200mL。（7）植物激素的配制第11页，课件共18页，创作于2023年2月2、培养基的配制（以1L培养基为例）1、计量根据配制培养基的量（1L）和母液的浓度计算需要吸取母液的量，计算公式：吸取量mL=培养基中物质浓度（mg/L）×1000mL/母液浓度（mg/L）。母液浓度/培养基中物质浓度=稀释倍数2、移液取大烧杯（1L）一只，按照计算吸取母液的量依次吸取各母液置于烧杯中备用。3、称取称取10g琼脂，30g蔗糖备用。第12页，课件共18页，创作于2023年2月4、融化用搪瓷量杯量取600～700mL的蒸馏水放在电炉上，加入琼脂，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状将其取下，加入蔗糖，搅拌使之溶解。5、混合将融化的琼脂和蔗糖倒入装有母液的大烧杯中，充分混合，用蒸馏水定容到1000mL。6、调pH用滴管吸取物质的量浓度为1mol/L的NaOH或HCl溶液调pH为6.0。第13页，课件共18页，创作于2023年2月