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鸡三碘甲状腺原氨酸(T3)酶联免疫分析

试剂盒使用阐明书

本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定鸡血清，血浆及有关液体样本中三碘甲状腺原氨酸(T3)的含量。

实验原理：

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸡三碘甲状腺原氨酸(T3)水平。用纯化的鸡三碘甲状腺原氨酸(T3)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入三碘甲状腺原氨酸(T3)抗原，再与HRP标记的三碘甲状腺原氨酸(T3)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，通过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最后的黄色。颜色的深浅和样品中的三碘甲状腺原氨酸(T3)呈正有关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过原则曲线计算样品中鸡三碘甲状腺原氨酸(T3)浓度。

试剂盒构成：

试剂盒构成

48孔配备

96孔配备

保存

阐明书

1份

1份

封板膜

2片（48）

2片（96）

密封袋

1个

1个

酶标包被板

1×48

1×96

2-8℃保存

原则品：90ng/ml

0.5ml×1瓶

0.5ml×1瓶

2-8℃保存

原则品稀释液

1.5ml×1瓶

1.5ml×1瓶

2-8℃保存

酶标试剂

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃保存

样品稀释液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃保存

显色剂A液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃保存

显色剂B液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃保存

终止液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃保存

浓缩洗涤液

（20ml×20倍）×1瓶

（20ml×30倍）×1瓶

2-8℃保存

样本解决及规定：

血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（-3000转/分）。认真收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

血浆：应根据标本的规定选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20

分钟左右（-3000转/分）。认真收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应当再次离心。

尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（-3000转/分）。认真收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参考实施。

细胞培养上清：检测分泌性的成分时，用无菌管收集。离心20分钟左右（-3000转/分）。认真收集上清。检测细胞内的成分时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达

成100万/ml左右。通过重复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成分。离心20分钟左右

（-3000转/分）。认真收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮快速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充足。离心20分钟左右（-3000转/分）。认真收集上清。分装后一份待检测，其他冷冻备用。

标本采集后尽早进行提取，提取按有关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能立即进行实验，可将标本放于-20℃保存，但应避免重复冻融.

不能检测含NaN3的样品，因NaN3克制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作环节：

原则品的稀释与加样：在酶标包被板上设原则品孔10孔，在第一、第二孔中分别加原则品100μl，然后在第一、第二孔中加原则品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加原则品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加原则品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加原则品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加原则品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为60ng/ml，40ng/ml，20ng/ml，10ng/ml，5ng/ml）。

加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其他各步操作相似）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液50μl，然后再加待测样品10μl（样品最后稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀