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细胞传代
目录
细胞传代基本概念与意义
细胞培养条件与设备准备
原代细胞分离与培养技术操作流程
常规传代方法比较与选择依据
常见问题分析与解决方案探讨
质量控制标准建立与实施效果评价
01
细胞传代基本概念与意义
Chapter
细胞传代是指将体外培养的细胞从一个培养容器转移到另一个培养容器的过程，以保持细胞的持续生长和分裂。
细胞传代的主要目的是避免细胞因过度生长而导致的接触抑制和营养不足，从而维持细胞的正常生理功能和增殖能力。
定义
目的
一种源自宫颈癌的细胞系，具有强大的增殖能力和稳定性，广泛用于生物学和医学研究。
HeLa细胞系
293细胞系
CHO细胞系
源自人胚胎肾细胞的细胞系，易于转染和表达外源基因，常用于基因功能和蛋白质表达研究。
中国仓鼠卵巢细胞系，具有高效的蛋白质合成和分泌能力，常用于生物制药生产。
03
02
01
细胞传代是维持体外培养细胞持续生长和分裂的关键步骤，为生物医学研究提供了稳定的细胞来源。
维持细胞生长
通过细胞传代，可以保持细胞的特定生理功能和表型特征，有助于研究细胞分化、发育和疾病发生机制。
保持细胞特性
细胞传代可用于大规模药物筛选和毒性测试，为新药研发和安全性评估提供有力支持。
促进药物筛选和毒性测试
细胞传代在再生医学领域具有广泛应用，如组织工程、细胞治疗和基因治疗等，为疾病治疗和损伤修复提供了新的途径。
推动再生医学研究
02
细胞培养条件与设备准备
Chapter
高效颗粒空气（HEPA）过滤器，确保实验室内空气质量达到无菌标准。
空气净化系统
对操作台、培养箱、移液器等设备进行定期消毒处理，防止细菌、真菌等微生物污染。
定期消毒
实验人员需熟练掌握无菌操作技术，如穿戴无菌手套、口罩和实验服等。
无菌操作技术
根据细胞类型、生长速度和特殊需求选择合适的培养基，如DMEM、RPMI1640等。
培养基选择
根据细胞需求添加适量胎牛血清（FBS）或新生牛血清（NBS），提供细胞生长所需的生长因子和激素。
血清添加
按照厂家说明书或实验需求，准确称量、溶解、定容、过滤除菌等步骤配制试剂。
试剂配制
用于细胞分离、沉淀和洗涤等。使用时需注意转速、时间和温度等参数设置，避免细胞损伤。
用于观察细胞形态、生长状态和密度等。使用时需注意调焦、光源选择和避免震动。
提供恒定的温度、湿度和CO2浓度，模拟细胞体内生长环境。使用时需注意定期清洗、消毒和校准。
提供无菌操作环境，保护实验人员和样品免受污染。使用时需注意空气流向、风速和紫外线消毒等设置。
倒置显微镜
二氧化碳培养箱
生物安全柜
离心机
03
原代细胞分离与培养技术操作流程
Chapter
根据实验需求选择合适的组织来源，如胚胎组织、成体组织等。确保组织来源健康、无污染，并符合伦理要求。
对组织进行清洗、修剪、切割等预处理，以去除血液、脂肪等非细胞成分，同时使组织更易于后续的消化或分散操作。
预处理方法
组织来源选择
利用特定的酶（如胶原酶、胰蛋白酶等）对组织进行消化，使细胞间的连接物质降解，从而将细胞分离出来。消化过程中需控制酶的种类、浓度、作用时间和温度等条件，以避免对细胞造成损伤。
酶消化法
通过物理方法（如研磨、过滤、吹打等）将组织分散成单个细胞。该方法操作简便，但可能对细胞造成一定的机械损伤，影响细胞活性。
机械分散法
接种密度
01
根据细胞类型、生长特性和实验需求确定合适的接种密度。接种密度过高可能导致细胞生长受限，而接种密度过低则可能影响细胞的贴壁和生长。
接种时间
02
在细胞分离后尽快进行接种，以保证细胞的活性和贴壁能力。同时，根据实验需求确定合适的接种时间点，如对数生长期、静止期等。
换液策略
03
制定合适的换液策略，以保证细胞生长所需的营养和代谢产物的及时清除。换液时需注意无菌操作，避免污染。根据细胞生长情况和实验需求确定换液频率和换液量。
04
常规传代方法比较与选择依据
Chapter
1
2
3
直接刮除法是一种相对简单的细胞传代方法，无需特殊试剂和设备，操作过程较为简便。
操作简便
由于直接刮除法需要使用刮刀等工具对细胞进行刮除，因此容易对细胞造成较大的机械损伤，影响细胞活性。
对细胞损伤较大
直接刮除法主要适用于贴壁不牢或容易脱落的细胞系，对于贴壁紧密的细胞系则效果不佳。
适用场景有限
03
适用场景广泛
酶解法适用于多种细胞系，尤其是贴壁紧密的细胞系，是细胞传代中常用的方法之一。
01
操作温和
酶解法利用酶的作用使细胞从培养器皿上脱落下来，操作过程相对温和，对细胞损伤较小。
02
需要控制消化时间
酶解法需要控制酶的消化时间，消化时间过长或过短都会对细胞造成不良影响。
直接刮除法与酶解法相比，操作简便但细胞损伤较大，适用场景有限；而酶解法操作温和但需要控制消化时间，适用场景广泛。
此外，还可以根
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