5-葡聚糖凝胶柱层析分离纯化蛋白质.pptVIP

*外水体积(Vo)：即凝胶柱中凝胶颗粒间自由空间的总体积，等于被完全排阻的大分子的洗脱体积。可以用一个已知相对分子质量远超过凝胶排阻极限的有色分子，如常用的蓝色葡聚糖-2000溶液通过柱床，即可测出外水体积Vo。内水体积（Vi）：为凝胶颗粒内部孔穴的总体积，可由m·WR求得（m为干凝胶质量，WR为凝胶吸水率）。*本实验中用SephadexG50（分离分子量范围1500~30000），以蒸馏水为洗脱剂（流动相）。分离蛋白A（黄色，分子量在G50的分离范围内）与蛋白B（蓝色，分子量大于G50的分离范围内）的混合物。凝胶柱层析

分离纯化蛋白质学习目的

了解：层析技术的基本原理;有效分配系数Kav的计算。理解：凝胶的选择和准备。掌握：凝胶层析的原理和操作方法;有效分配系数Kav的意义。重点：1、凝胶层析的原理和实际操作步骤。2、分配系数与被分离分子量之间的关系。蛋白质的分离纯化蛋白质分离纯化的方法很多，主要是根据蛋白分子之间特异性的差异，如分子大小，溶解度，电荷等建立起来的。性质方法分子大小透析、超滤、密度梯度离心、凝胶层析等溶解度等电点沉淀、盐析、有机溶剂沉淀等电荷电泳、离子交换层析等吸附性质吸附层析对配体分子的亲和力亲和层析