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重组南瓜胰蛋白酶抑制剂Ⅰ的分离纯化及活性研究的中期报告

摘要：

本研究旨在分离纯化南瓜胰蛋白酶抑制剂Ⅰ并研究其活性，为进一步研究南瓜胰蛋白酶抑制剂的作用机制提供基础数据。在前期实验中，我们通过南瓜籽粉提取液的离子交换层析、凝胶过滤层析和亲和层析三步分离纯化得到了南瓜胰蛋白酶抑制剂Ⅰ纯品。本阶段实验采用检测纯化后样品的特性和活性。

关键词：南瓜胰蛋白酶抑制剂Ⅰ；分离纯化；活性研究

一、实验目的

1.1分离纯化南瓜胰蛋白酶抑制剂Ⅰ。

1.2研究纯品的酶抑制活性和相关特性。

二、实验材料与方法

2.1实验材料

南瓜籽粉提取液、DEAE-52、SephadexG-100、heparin-Sepharose6B亲和层析柱。

2.2实验方法

（1）离子交换层析

将提取液经过DEAE-52柱层析，用0.5mol/LNaCl梯度洗脱南瓜胰蛋白酶抑制剂Ⅰ。

（2）凝胶过滤层析

将离子交换层析得到的样品采用SephadexG-100柱层析。

（3）亲和层析

将凝胶过滤层析得到的样品采用heparin-Sepharose6B亲和层析柱。

（4）活性研究及相关特性检测

采用酶标板检测南瓜胰蛋白酶抑制剂Ⅰ的酶抑制活性，利用SDS检测纯度和分子量。

三、实验结果

3.1离子交换层析纯化的结果

离子交换层析分离得到了南瓜胰蛋白酶抑制剂Ⅰ的部分纯品，分子量估计为10-15kDa，通过酶标板实验