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实验一血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳

【实验目的】

（1）了解电泳的一般原理，掌握醋酸纤维素薄膜电泳操作技术。

（2）测定人血清中各种蛋白质的相对百分含量。

【实验原理】

带电荷的胶体粒子在电场中移动的现象称电泳。醋酸纤维素薄膜电泳法是以醋酸纤维素

薄膜作为支持物。

血清中含多种蛋白质，当在pH这8.6时，这些蛋白质均带负电，它们在电场中向阳极

移动，由于各种蛋白质所带负电荷多少及颗粒大小不同，所以在同一电场，同一pH环境中

涌动速度不同。

本实验以醋酸纤维素为电泳支持物，分离各种血清蛋白。血清中含有清蛋白，α~球蛋

白，β~球蛋白，γ~球蛋白和各种脂蛋白等。各种蛋白质由于氨基酸组分，立体构象，分子

量，等电点及形状不同，在电场中迁移速度不同。分子量小，等电点低，相同碱性pH。

表1人血清中12种蛋白质的等电点及分子量

蛋白质名称等电点（pl）分子量

清蛋白4.8869000

α~球蛋白5.06α—200000

1

α—300000

2

β~球蛋白5.1290000—150000

γ~球蛋白6.85-7.50156000—30000

缓冲体系中，带负电喝多的蛋白质颗粒在电场中移动速度快。例如，以醋酸纤维素薄膜

为支持物，正常人血清中pH=8.6的缓冲体系中电泳1h左右，染色后可显示5条区带。清

蛋白泳动最快，其余依次为α~，α~,β~及γ~球蛋白。这些区带经洗脱后可用分光光度法定

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量，也可直接进行光吸收扫描自动绘出区带吸收峰及相对百分比。临床医学常利用它们异常

区带的出现作为临床鉴别诊断的依据。此法由于操作简单，快速。

图1正常人血清醋酸纤维素薄膜电泳示意图

为清蛋白，2，3，4，5分别为α,α,β~及γ~球蛋白，6为点样原点

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清蛋白球蛋白附注

ααβγ

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妊娠↓↓↑↓中毒时更明显，产后2-3个月正常

婴儿↑↑↑6个月时γ正常，其他成分6-10岁时正常

糖尿病↓

多发性骨髓瘤↑↑↑↑异常球蛋白，可在β和γ区带间出现M区带

肝硬变↓↓↑↑↑↑在晚期失代偿时

阻塞性黄疸↑

无丙种球蛋白血症↓↓

全身性红斑狼疮↓↑↑↑

类风湿性关节炎