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重组蛋白制备
2024-01-27
目录
CONTENTS
引言
重组蛋白表达系统
重组蛋白纯化方法
重组蛋白质量控制与活性测定
重组蛋白在生物医药领域应用
重组蛋白制备技术挑战与展望
01
引言
CHAPTER
重组蛋白是利用基因工程技术，将目标基因导入宿主细胞，通过宿主细胞的表达系统合成具有特定功能的蛋白质。
重组蛋白定义
重组蛋白在生物医药、农业、工业等领域具有广泛应用，如治疗性抗体、疫苗、诊断试剂、工业酶等。随着生物技术的不断发展，重组蛋白的应用范围和市场需求不断扩大。
重组蛋白重要性
第一代技术
01
以原核表达系统为主，如大肠杆菌表达系统。具有生长快、操作简单、成本低等优点，但表达产物的修饰和加工不完善，可能影响蛋白活性。
第二代技术
02
以真核表达系统为主，如酵母、昆虫和哺乳动物细胞表达系统。这些系统能对表达的蛋白质进行正确的翻译后修饰和加工，提高蛋白质的活性。
第三代技术
03
基于无细胞表达系统和合成生物学技术的重组蛋白制备方法。这些方法具有更高的灵活性和可控性，能够实现复杂蛋白质的高效合成和制备。
02
重组蛋白表达系统
CHAPTER
大肠杆菌表达系统
最常用，具有高表达量、快速生长和遗传操作简单等优点。
乳酸菌表达系统
适用于食品级重组蛋白的生产，安全性高。
枯草芽孢杆菌表达系统
适用于分泌蛋白的生产，具有较强的蛋白分泌能力。
03
哺乳动物细胞表达系统
如CHO细胞、HEK293细胞等，适用于生产具有特定生物活性的重组蛋白。
01
酵母表达系统
如毕赤酵母，具有高表达量、易于培养和遗传稳定等优点，适用于大规模生产。
02
昆虫细胞表达系统
如杆状病毒-昆虫细胞系统，适用于复杂蛋白的表达和翻译后修饰。
01
利用大肠杆菌提取物进行体外转录和翻译，适用于小规模、快速合成。
基于大肠杆菌无细胞系统的重组蛋白合成
02
利用真核细胞提取物进行体外转录和翻译，适用于复杂蛋白的合成和翻译后修饰。
基于真核无细胞系统的重组蛋白合成
03
将无细胞蛋白合成与微流控技术相结合，实现高通量、自动化的重组蛋白生产。
基于微流控技术的无细胞蛋白合成系统
03
重组蛋白纯化方法
CHAPTER
原理
色谱法是一种物理分离技术，利用固定相和流动相之间的相互作用力差异，实现样品中各组分的分离。在重组蛋白纯化中，色谱法主要利用蛋白质与色谱介质之间的吸附、分配、离子交换等作用力实现分离。
技术应用
色谱法在重组蛋白纯化中应用广泛，包括凝胶过滤色谱、离子交换色谱、亲和色谱等。其中，凝胶过滤色谱主要根据蛋白质分子大小进行分离；离子交换色谱则利用蛋白质与离子交换剂之间的电荷相互作用进行分离；亲和色谱则利用生物分子间的特异性相互作用进行分离。
超滤法是一种膜分离技术，利用超滤膜对溶液中不同分子量物质的截留作用，实现蛋白质的分离和纯化。超滤膜具有一定孔径大小，只允许小于膜孔径的小分子物质通过，而大于膜孔径的蛋白质则被截留在膜表面。
原理
超滤法在重组蛋白纯化中主要用于去除低分子量杂质、浓缩蛋白质溶液以及更换蛋白质的缓冲液等。超滤膜的选择需根据目标蛋白质的分子量、溶液性质等因素进行优化。
技术应用
电泳法是利用电场力作用，使带电粒子在电场中移动，从而实现分离的方法。在重组蛋白纯化中，常用凝胶电泳进行分离。
电泳法
沉淀法是通过改变溶液的某些性质（如pH值、离子强度等），使蛋白质从溶液中析出形成沉淀的方法。常用的沉淀法包括盐析法、有机溶剂沉淀法等。
沉淀法
透析法是利用半透膜原理，将大分子物质与小分子物质分开的方法。在重组蛋白纯化中，透析法主要用于去除盐类、小分子杂质以及更换蛋白质的缓冲液等。
透析法
04
重组蛋白质量控制与活性测定
CHAPTER
包括原料检验、生产过程监控、成品检验等环节，确保产品质量可控。
建立严格的质量控制流程
根据重组蛋白的用途和特性，制定相应的质量标准，如纯度、分子量、等电点等。
制定质量标准
如高效液相色谱、质谱等，对重组蛋白进行全面的质量分析。
采用先进的检测技术
酶活性测定
通过底物转化速率等方法测定重组蛋白的酶活性，如激酶、蛋白酶等。
结合活性测定
利用荧光偏振、表面等离子共振等技术测定重组蛋白与其他分子的结合活性。
细胞活性测定
通过观察细胞生长、凋亡等表型变化，评估重组蛋白对细胞活性的影响。
03
02
01
1
2
3
通过加速老化实验等方法，评估重组蛋白在不同条件下的稳定性，如温度、pH值、氧化剂等。
稳定性评估
根据稳定性评估结果，优化重组蛋白的保存条件，如添加稳定剂、调整pH值等，以延长产品保质期。
保存条件优化
制定详细的运输和储存指南，确保重组蛋白在运输和储存过程中的质量稳定。
运输和储存注意事项
05
重组蛋白在生物医药领域应用
CHAPTER
抗体药物的发现与筛选
利用重组蛋白技术，可以高
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