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复合诱变及化学融合法构建酒精高产菌株的中期报告

本实验旨在通过复合诱变及化学融合法筛选出酒精高产菌株，中期已完成诱变体的筛选和化学融合。

一、复合诱变

本实验选用紫外线和化学剂（EMS）进行复合诱变。具体步骤如下：

1.预处理：将酵母菌培养于YPD固体培养基中，分别在37℃和30℃条件下分别孵育48小时和72小时，分别得到寿命的两个阶段。将酵母菌接种于YPD液体培养基中，孵育至对数生长期。

2.紫外线照射：将酵母菌培养于96孔板中，暴露于254nm紫外线下，每孔照射5min。

3.EMS处理：将酵母菌过滤后加入EMS（0.02%），孵育1小时。

4.处理后分化：将紫外照射和EMS处理后的酵母菌分别接种于YPD固体培养基上，培养48小时后筛选出产酒精量高的诱变体。

经过筛选，我们得到10株酒精产量笔者显著高于野生型酵母的诱变体。

二、化学融合

将高酒精产量的两株诱变体进行化学融合，具体步骤如下：

1.处理细胞壁：将细胞壁酶加入到诱变体细胞中，50℃反应1小时。

2.细胞融合：将两个诱变体混合，并加入PEG2000融合剂反应5-10分钟。

3.质粒转移：将融合产物铵盐处理，以选取含有质粒的克隆。

经过化学融合，我们得到10株融合体，并筛选出两株酒精产量显著高于野生型的菌株。

下一步我们将进行基因分析和酒精生产效率的进一步研究，以找到高产酒精菌株的关键基因及其调控机