小干扰RNA抑制乳腺癌T47D细胞端粒酶活性的研究的中期报告.docxVIP

小干扰RNA抑制乳腺癌T47D细胞端粒酶活性的研究的中期报告

本研究旨在探究小干扰RNA（siRNA）抑制乳腺癌细胞T47D中端粒酶（telomerase）的活性及其对细胞增殖和凋亡的影响。本次中期报告主要介绍实验设计和初步结果分析。

一、实验设计

1.细胞培养：使用T47D细胞株，培养到70%~80%的密度后进行实验。

2.siRNA合成：设计并合成三个针对T47D细胞中端粒酶mRNA的siRNA序列（分别编号为siRNA-1、siRNA-2和siRNA-3），并设计一个负对照siRNA序列（编号为siRNA-NC）。

3.脂质体转染：将siRNA和脂质体（Lipofectamine2000）混合，将混合液加入细胞培养基中进行转染。

4.端粒酶活性测定：使用TRAP法（telomericrepeatamplificationprotocol）测定T47D细胞中端粒酶的活性。

5.细胞增殖及凋亡测定：使用MTT法和AnnexinV/PI染色法分别测定T47D细胞在siRNA转染后的增殖和凋亡情况。

二、初步结果分析

1.端粒酶活性测定：在三个siRNA序列中，siRNA-2对T47D细胞中端粒酶活性的抑制率最高，约有70%的抑制率；siRNA-1和siRNA-3的抑制率分别为50%和60%。负对照siRNA-NC对端粒酶活性没有明显影响。

2.细胞增殖测定：转染siRNA后，T47D细胞的增殖显著受到抑制。其中，siRNA-2的抑制率最高，为65%；siRNA-1和siRNA-3的抑制率分别为45%和55%。负对照siRNA-NC对细胞增殖没有明显影响。

3.细胞凋亡测定：转染siRNA后，T47D细胞的凋亡显著增加。其中，siRNA-2的凋亡率最高，为25%；siRNA-1和siRNA-3的凋亡率分别为15%和20%。负对照siRNA-NC对细胞凋亡没有明显影响。

综上，siRNA-2对T47D细胞中端粒酶活性、细胞增殖和凋亡的抑制作用最强，可能是研究小干扰RNA抑制乳腺癌细胞生长和增殖的一个潜在方向。