肝细胞的培养方法2006.3.1.pdfVIP

肝细胞培养方法

一、培养概要

1）在无菌状态下，采取大鼠的游离肝细胞

2）将细胞置于well中，在Williams’mediumE(5%cuffserum)20%O，5%CO的

22

环境下培养2.5小时后，将细胞清洗一次。

3）之后，再在相同的培养基中培养21.5小时（合计24小时）

4）用得到的第一代培养肝细胞进行各种试验。

二、实验方法:

1洁净台的使用方法

1）将灭菌物喷过酒精后，置入其中。

2）手洗过后，喷过酒精，方可伸入其中。

3）细胞培养用的培养皿也需盖上盖子，四周喷过酒精后方可置入其

中。

4）在不操作的时候，只将1号键的按纽处于打开的状态（紫外线照

射）。在操作中，只能打开两个按纽（荧光灯，风）。要注意不要

让肌肤直接接触紫外线。

5）在使用洁净台时要点着喷灯。但是由于之前有过煤气喷灯导致火灾

的事故，因此点着喷灯的时候，千万不要离开。

6）在洁净台内部，通常放置以下的物品。除此之外的，在每次实验结

束后要尽快拿出去，注意洁净台内部尽量不要放物品。

7）装有用70%EtOH浸过剪好棉花的罐子

装有吸移管橡胶乳头、吸耳球的小托盘

外科用手术钳子（大）

8）用钳子镊取浸有70%EtOH的棉花，将洁净台内的床擦干净，开始

操作。棉花或者乙醇一旦没有了，要马上供给，将周围用酒精喷过

后置入其中。

9）以上第8）点的操作最好是在感觉到洁净台内床有污染时进行。

2培养板的准备

1

24井一次性培养板3块，为已经消毒灭菌好的，可直接使用。

3瓶的打开，关闭方法

1）瓶有100ml、250ml、500ml，1000ml，每一种都可以是半永久性的

高压灭菌器。

2）瓶绝对不能用手打开的，用钳子（大）打开。但是，因为也有第一

下打不开的情况，这种时候，只有第一下可以用手打开。

3）在洁净台外，将瓶口周围的塑料绝缘带去掉，瓶的周围喷乙醇水，

之后置于洁净台内。

4）首先，在打开瓶子之前用喷灯灼烧瓶口（*通常用喷灯将瓶口、盖、

还有钳子灼烧灭菌是很好的）。

5）灼烧钳子。

6）用钳子将盖子打开，再将瓶口灼烧。将瓶口置于洁净台内床以外的

地方。

7）让内部的溶液流出。

8）瓶的口、盖、钳子用或灼烧，用钳子将口关闭。

9）最后封上塑料绝缘带。

*******目前为止的准备*******

1消毒用乙醇液的调制

1）调制70%EtOH液（溶媒为dHO），置入喷雾器中。

2

2高压灭菌器

·3*5硅胶管1支(40-60cm)

·离心管(50ml)6支

·离心盖6个

·手术器具(外科手术用钳子小2，大1；剪刀小1，大1；钳子1)

·手术线1卷

·100ml烧杯3个

2

·150目筛子2个

·纱布1个

·移液管