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实验二实验动物的编号标记及注射方法编号标记通常是动物实验开展时需要进行的第一项工作。编号标记的目的是使个体易于识别,便于实验者观察每个动物的变化,并为下一步进行的分组工作做好准备。无论何种编号方法,良好的标记方法都应满足号码清晰、耐久、简便和适用的要求。一实验目的和要求学习和掌握实验动物的编号标记和注射方法。二实验材料和用具小鼠、墨水(红、黑色)、毛笔、注射器、镊子、消毒棉球、生理盐水三实验内容(一)编号标记方法标记方法可分为永久(终生)标记法和暂时性标记法。前者有墨汁浸入法、耳号法,后者有颜色涂布法、挂牌法等,可根据实验动物和用途的不同予以先用。1哺乳动物的标记(1)临时标记A染色法染色法是用化学试剂在动物身体明显部位如被毛、四肢等处进行涂染,或用不同颜色等来区分各组动物,是实验室最常用、最容易掌握的方法。常用的标记液有:红色:0.5%中性红或碱性品红溶液;黄色:3%~5%苦味酸溶液;咖啡色:2%硝酸银溶液(涂后需光照10分钟);黑色:煤焦油酒精溶液。染色法多用于实验周期较短,动物数量不多的情况。这种方法虽简单,动物无痛无损伤,但由于动物之间相互摩擦、舔毛,尿、水浸渍被毛或脱毛,或因日久颜色自行消退等原因,不宜用于长期的实验。此法主要用于大鼠、小鼠、豚鼠和白色的家兔。B涂漆或贴胶布用油漆在动物脚或体表涂漆进行标记,或用胶布贴在动物腿上进行标记,也都是效果较好的临时性标记方法。(2)半永久标记A挂耳标签法挂耳标签法可用来标记多种动物。市售的耳标签一般是由塑料、铝或钢片制成。使用耳标签时必须仔细挑选大小合适的耳标签。通常使用塑料制品。B戴项圈法首先,将号码冲压在圆形或方形金属牌上。金属牌常用铝板或不锈钢制作,长期使用不生锈。然后将标有号码的金属薄片固定在拴动物的皮带圈上,将此圈固定在动物颈部。(3)永久性标记A烙印法烙印法是用刺号钳将号码烙压在动物无体毛或明显的部位,如耳朵、面鼻部和四肢部位等。另外,可用烧红的铁烙在动物体表明显的部位,烧烙出号码,然后用酒精为溶剂的染料涂抹,以增加号码的明显性。此类方法应注意烙号部位的污染和预防感染。B打耳孔法打耳孔法是专门用于动物编号的耳孔机直接在动物耳朵上打孔或打成缺口编号的方法,用剪刀将耳缘剪缺口也可代替此方法。用打孔的位置和孔的数量来标记。一般习惯在耳缘内侧打小孔,按前、中、后分别表示为1、2、3号,在耳缘部打成一缺口,则分别表示4、5、6号,打成双缺口则表示7、8、9号。左耳表示个位数,右耳表示十位数。在加上左耳中部打一孔表示100,右耳中部打一孔表示200,按此法可编至400号。打孔法应注意防治孔口愈合,可使用滑石粉涂抹在打孔局部。C剪指法小鼠可用此法,将小鼠左右前肢的脚趾按不同排列代表不同的数字。一般习惯从左向右第一趾为1,第二趾为2,第三趾为4,第四趾为7。每一、二趾同时剪去为3号,若第一、四趾同时剪去为8号,一次类推。右脚表示个位数,左脚则表示十位数,按此法可剪成1-99号。若配合耳号标记,左耳表示千位,右耳表示百位数可编至4999号。剪指编号方法的有点是各种毛色的小鼠都能使用,避免了黑色小鼠用颜色涂擦被毛后不易分辨的缺点。缺点:在一些长期实验中,若小鼠脚趾剪去太少,实验后期小鼠长出新生脚趾会不易区分;若脚趾剪去太多,则动物容易因失血过多导致健康状况不良。一般剪完后用硝酸银棉签烧烙血管止血。D针刺法人工针刺号码常用于兔的标记,先用手拔去兔耳的被毛,人工针刺号码,刺后涂以酒精黑墨即可。目前市售的兔用打号器原理与此相同。E挂牌法这是一种替代方法。不在动物身上做标记,而在笼上挂牌作为编号。使用时应特别注意不要混乱。2两栖类和爬行类动物的标记(1)剪趾法肢体正常发育的两栖类和爬行类动物的标记大多采用剪趾法,这是一种有效的永久性标记方法。通常若每只脚只剪除一趾,对动物个体的行为和生存没有影响。但对哪些趾有特殊功能的动物不应该实施剪趾术。(2)除鳞甲法对蛇来说除掉尾下鳞甲是一个较好的永久性标记方法。用小号外科剪刀或采取灼烧法除掉鳞片(为防止鳞甲的再生必须除掉其皮的下层)。还可以采用电灼烧法,在皮肤上灼印数字或字母,为防鳞甲再生也必须灼伤皮肤的深层。(3)纹身染色法对两栖类和爬行类动物也可以采用纹身染色法进行标记。标记时只能使用没有毒性作用的色素、固定剂及溶剂制成的油漆,不能使用普通油漆,否则会造成动物死亡。(4)剪壳法对龟类动物可采用在其背甲边缘盾板上剪缺口
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