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放射免疫分析法原理及操作注意事项

放射免疫分析的原理：就是利用放射性核素标记抗原或抗体，然后与被测的抗体或抗

原结合，形成抗原抗体复合物的原理来进行分析的。它又分为两种方法。

一、竞争性RIA，又称传统RIA

主要特点：标记的是抗原。其原理：未知抗原Ag+标记抗原Ag+已知定量抗体Ab标

记抗原与抗体复合物AgAb+未知抗原与抗体复合物AgAb+游离标记抗原Ag（去除）

（未知抗原多，标记抗原与定量抗体结合的复合物就少，表现为负相关）。

临床上甲胎蛋白（AFP），癌胚抗原（CEA），8一微球蛋白（pz—MG），铁蛋白

（Fer），人绒毛膜促性腺激素p亚单位（HCG-13）等的检测都是竞争性RIA法原理。竞

争性RIA法，根据加样顺序与温育次数的区别，反应方式分三种：平衡法，将非标记抗原

（被测物与标准品）、抗体、标记抗原依次加入反应管，混匀后一次性温育至反应达到动

态平衡，再加分离剂分离B（复合物）与F（游离物）如：AFP，8一MG，Fer；顺序加样

法，先将非标记抗原（被测物与标准品），与抗体在反应管内作第一次温育，待反应达到

动态平衡后。加入标记抗原，再作第二次温育后，分离B与F如：CEA；急诊检测法：为临

床急需检测结果而提出的反应方式，不等RIA反应达到动态平衡就终止反应；分离剂的选

择有，PEG（聚乙二醇），第二抗体等。

现在一般采用的是：第二抗体与PEG合用的方法，称为双抗体一PEG法。

PEG原理：PEG浓度达到7一9时能使抗原一抗体复合物沉淀。

优点：经济，简便，通用。

缺点：重复性差，非特异性结合率高。

第二抗体：第一抗体是可与被测抗原进行特异结合的抗体，来自家兔或豚鼠。用第一

抗体为抗原，作用到羊，马身上，产生的抗第一抗体的抗体称第二抗体。第二抗体与第一

抗体在适当条件下发生特异性结合，生成分子量很大的免疫复合物（AgAb×Ab），能

自然沉淀。

优点：分离效果好。非特异性结合率低。

缺点：增加经费投入。需要第二次温育，延长了时间。

所以就产生了两者合用的双抗体一PEG法，它结合了上述两种方法的优点。

二、非竞争性RIA，又称免疫放射分析（IRMA）

主要特点：标记的是抗体。

按反应原理分为两种：

（一）单位点IRMA

其原理：抗原只有一个抗原决定簇，所测的抗原为小分子抗原，Ab+AgAgAb+Ab

+ImAd—AgImAd—AgAb+AgAb（去除）（负相关）：（ImAd—Ag）固相抗原免疫

吸附剂，一般用聚苯乙烯塑料珠包被抗原；双位点IRMA：抗原有两个抗原决定簇，所使

用的两种亚型抗体在与同一抗原分子结合时互不干扰ImAd—Ab+AgImAd—Ab—Ag+

AbImAd-Ab—Ag-Ab+Ab（过剩的，游离的）：（ImAd—Ab）固相抗体免疫吸附剂，

一般用聚苯乙烯塑料珠包被抗体。

（二）双位点IRMA，又称双抗体夹心法

从加样测定顺序上看，有三种方法：固相抗体先与未知抗原结合，再与标记抗体结合

（正向两步法）。然后去除游离的标记抗体，测固相抗体一抗原一标记抗体复合物的放射

性计数；未知抗原先与标记抗体结合，再与同相抗体结合（反向两步法）。然后去除游离

的标记抗体，测固相抗体一抗原一标记抗体复合物的放射性计数；未知抗原与固相抗体和

标记抗体同时反应（一步法，又称同时加样法）。然后去除游离的标记抗体，测固相抗体

一抗原一标记抗体复合物的放射性计数。

这三种方法都生成夹心状的抗体一抗原一抗体复合物，故又称双抗体夹心法。

糖类抗原CA50，CA125就用的是其中的第三种方法（一步法），血清中的未知抗原

与固相抗体和标记抗体同时反应，生成夹心状的抗体一抗原一抗体复合物，然后去除游离

的标记抗体，测固相抗体一抗原一标记抗体复合物的放射性计数。

三、RIA法的影响因素

pH和离子强度；反应温度，温度一般为37℃，也有45℃，室温，4℃冰箱；反应时

间，操作中的注意项：戴手套、防护镜等，将试剂盒从冰箱中取出，室温下放置30mi

n方可使用。

（1）编号：第一排是标准管：根据标准品浓度由低到高A，