T_SHRH 015-2018 化妆品-酪氨酸酶活性抑制实验方法.docxVIP

ICS?71.100.70

C2682

Y42

上海日用化学品行业协会团体标准

T/SHRH?015-2018

_________________________________________________________________________________________

化妆品-酪氨酸酶活性抑制实验方法

Cosmetics?-Tyrosinase?Activity?Inhibition

Test?Method

2018-12-01?发布 2018-12-30?实施

上海日用化学品行业协会?发布

目 次

前言…………… 2

1.范围………………………… 3

2.原理………………………… 3

3.仪器………………………… 3

4.试剂………………………… 3

5?实验方法…………………… 3

6.结果计算…………………… 4

7.试验有效性验证…………… 4

8.结果报告…………………… 5

1

前 言

本标准按照GB/T1.1-2009给出规则起草。

本标准由上海日用化学品行业协会提出和归口。

本标准起草单位：上海家化联合股份有限公司、东阿阿胶股份有限公司、伽蓝（集团）股份有限公

司、上海相宜本草化妆品股份有限公司、上海中翊日化有限公司、上海市质量监督检验技术研究院、玫

琳凯（中国）有限公司、上海天祥质量技术服务有限公司、上海清轩生物科技有限公司、汉高中国（投

资）有限公司、广东博溪生物科技有限公司、上海日用化学品行业协会。

本标准主要起草人：陈媛祺、陈志涛、范倩文、廖峰、吴建铭、吕智、孙培文、林艺青、周泽琳、

万向红、李琼、高宏旗、金坚、陈亦华

2

化妆品-酪氨酸酶活性抑制实验方法

1．范围

本标准规定了酪氨酸酶活性抑制实验的基本技术要求。提供一种美白原料的评估方法，适用于宣称通过

抑制酪氨酸酶活性而达到美白效果的水溶性原料的功效评价。

2.原理

在皮肤黑色素生物合成中，酪氨酸酶是关键酶，作用于多巴，形成多巴醌，后者自发进行一系列反应最

后形成黑色素。酪氨酸酶在pH6.8的磷酸溶液中，可催化多巴转化成多巴醌，在分光光度计475nm处可测

定吸光值。具有酪氨酸酶活性抑制作用的原料可以减少多巴转化成多巴醌，从而降低吸光值，根据吸光

值的变化，评估原料对酪氨酸酶活性的抑制作用。

3.仪器

分析天平：感量?0.1mg；

试管：10mL；

可调节移液枪：1.00mL；

紫外可见分光光度计。

4.试剂

除有另外说明外，所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T?6682规定的一级水。

Na2HPO4·12H2O；

一水合柠檬酸；

pH6.8?的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液

① 0.2mol/L?Na2HPO4·12H2O：14.33g?溶于?200mL?水，用玻棒搅拌至溶解；

② 0.1?mol/L?一水合柠檬酸：2.1g?溶于?100mL?水，用玻棒搅拌至溶解；

③ pH6.8?磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液：0.2mol/L?Na2HPO4·12H2O?154.5?mL，加入?0.1?mol/L?一水合柠

檬酸?45.5?mL，配制成?200mL?的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液；

酪氨酸酶，活力≥1000unit/mg?固体；

左旋多巴，纯度≥98%；

酪氨酸酶溶液：用?pH6.8?磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液配制，100u/mL，临用配制；

左旋多巴溶液：用?pH6.8?磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液配制，1mg/mL，避光保存；

阳性对照：曲酸，纯度≥98.5%

5.实验方法

3

T-样品管

T0-样品本底

C-DPPH?管

C0-溶剂本底

样品溶液（mL）

1

1

—

—

磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液

（mL）

—

0.5

1

1.5

酪氨酸酶溶液（mL）

0.5

—

0.5

—

左旋多巴溶液（mL）

2

2

2

2

平行次数

3/样

1/样

3/试验

1/试验

阳性对照物用?pH6.8?磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液稀释成：1mg/mL、0.2mg/mL、0.04mg/mL、0.008mg/mL

系列浓度梯度用以验证试验系统。

受试物处理：受试物用磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液稀释为多级浓度样品。

参照表?1，使用?10mL?试管设立样品管（T）、样品本底（T0）、酶反应管（C）和溶剂本底（C0），每一

样品的每个受