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pcr扩增实验报告
篇一：DNA提取及PCR扩增实验
报告
PCR扩增及DNA琼脂糖凝胶电泳
刘琳1131428环境科学
一、实验目的
1．学习并掌握PCR扩增的基本原
理与实验技术。
2．对扩增后的DNA进行琼脂糖凝
胶电泳试验，并分析相应结果。
二、实验原理
1.PCR扩增
多聚酶链反应（PCR）技术的原理
类似于DNA的天然复制过程。在微量离
心管中加入适量缓冲液，加入微量模板
DNA、四种脱氧核苷酸（dNTP）、耐热
Taq聚合酶及两个合成DNA的引物，而
后加热使模板DNA在高温下（94℃）变
性，双链解链，这是所谓变性阶段。降
低溶液温度，使合成引物在低温（55℃）
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与模板DNA互补退火形成部分双链，这
是所谓退火阶段。溶液反应温度升至中
温（72℃），在Tap酶作用下，用四种dNTP
为原料，引物为复制起点，模板DNA的
一条双链在解链和退火之后延伸为两条
双链，这是延伸阶段。如此反复，在同
一反应体系中可重复高温变性、低温退
火和DNA合成这一循环，使产物DNA
重复合成，并在重复过程中，前一循环
的产物DNA可作为后一循环的模板
DNA而参与DNA的合成，使产物DNA
的量按指数方式扩增。经过30～40个循
环，DNA扩增即可完成。
2.DNA琼脂糖凝胶电泳实验
DNA分子在高于其等电点的溶液中
带负电，在电场中向阳极移动。在一定
的电场强度下，DNA分子的迁移速度取
决于分子筛效应，即分子本身的大小和
构型是主要的影响因素。DNA分子的迁
移速度与其相对分子量成反比。不同构
型的DNA分子的迁移速度不同。该电泳
方法以琼脂凝胶作为支持物，利用DNA
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分子在泳动时的电荷效应和分子筛效
应，达到分离混合物的目的。
三、实验材料
仪器：PCR扩增仪、薄壁管、离心
管、移液枪、枪头、微波炉、电泳仪、
水平电泳槽、制胶版、紫外透射仪。
试剂：TapDNA聚合酶、dNTP、
buffer、两种引物、16S全长DNA样本、
无菌ddH2O、模板DNA、TBE、琼脂
糖、EB、显色剂。
四、实验步骤
1.PCR扩增
本次试验选择细菌16SrDNAV3区
片段进行扩增。
根据计算，首先取离心管按照
10×Buffer、1uldNTP、ul341GC、ul
534、ulTaq、ddH2O的比例配置足量
的PCR反应体系。
分别向9个薄壁管中分别加入24ul
的反应体系，并分别添加8种不同的模
版，并于第9个薄壁管中加入无菌
ddH2O作为阴性对照。
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将薄壁管放入PCR扩增仪中，按照
预定程序进行PCR扩增。其中循环过程
需要达到30~40次。程序如下：
预变性：94℃3min
循环：94℃变性30s
55℃退火30s
72℃延伸30s
末次延伸：72℃5min
PCR扩增完成后，将样品取出并保
存于15℃环境中。
2.DNA琼脂糖凝胶电泳实验
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