离子色谱法电导检测多肽药物中的三氟乙酸.docxVIP

离子色谱法电导检测多肽药物中的三氟乙酸

张晨光a，吴方睿b,赵春华c

a中国疾病预防控制中心营养与食品安全所，北京，100021

b浙江大学药学院，杭州，310058

cCTI华测检测（青岛）技术有限公司，青岛，266100

摘要：本文建立了测定多肽药物中三氟乙酸的离子色谱分析方法。运用该方法，待测离子在较宽的线性范围内线性关系良好（R2=0.9993），检测限为30pg/L，加标回收率在95.7%?98.3%之间。方法简便易行，灵敏度高，结果准确。

关键词：离子色谱，电导检测，多肽药物，三氟乙酸

三氟乙酸主要用于新型农药、医药和染料等的生产，在材料、溶剂等领域也有较大的应用开发潜力。三氟乙酸主要用于合成多种含三氟甲基和杂环的除草剂，目前可以合成多种带有毗啶基、喹琳基的新型除草剂；作为极强的质子酸，它广泛用于芳香族化合物烷基化、酰基化、烯烃聚合等反应的催化剂；作为溶剂，三氟乙酸是氟化、硝化及卤代反应的优良溶剂，特别是其衍生物三氟乙酰基对羟基和氨基的优良保护作用，在氨基酸和多肽化合物合成方面有着非常重要的应用，用于多肽合成中除去氨基酸的叔丁氧羰基（t-boc）保护基【1】。

1材料与方法

1.1仪器与试剂

IC6000离子色谱仪（合肥皖仪科技有限公司）HW2000色谱工作站（上海千谱软件有限公司）；WY-1自再生抑制器（合肥皖仪科技有限公司）；超纯水机（合肥皖仪科技有限公司）。电导检测器（合肥皖仪科技有限公司）;WY-Anion2型阴离子色谱柱（250mmX4.6mmi.d.，合肥皖仪科技有限公司）；RP柱（AgelaTechnologies；）0.22pm有机滤膜（AgelaTechnologies）。/Product.asp?action=searchdq=1860proClass=0textitle=超纯水机

碳酸钠（基准试剂，国药集团）；乙腈（色谱级，美国天地）；试验用二次去离子水（18.2MQ）为超纯水机制备。/product.asp2actionwsearch

样品和为客户提供。

1.2色谱条件

WY-Anion2阴离子分析柱（150mmX4.6mmi.d.），柱温25°C；以2.0mmol/LNa2CO3为淋洗液进行淋洗，流速为1.0ml/min；WY-1自再生抑制器；电导检测池；电流30mA；进样体积100pL，峰面积定量。

1.3溶液的配制

2.0mmol/LNa2CO3：称取0.2120g碳酸钠基准试剂，加水溶解，定容至1000mL,摇匀。三氟乙酸所需浓度均有1000mg/L的标准储备液配制而成。

1.4样品的制备

精确称取药物样品0.1056g，加入10ml乙月青，超声萃取20min，待样品完全溶解后，冷却至室温，转移至100ml容量瓶中，用二次去离子水定容至刻度。

2结果与分析

2.1有机萃取溶剂的选择

分别用甲醇、异丙醇和乙青对多肽药物进行萃取溶解，试验发现运用甲醇和异丙醇不能将样品完全溶解，而运用乙青对样品进行溶解的效果很理想，因此有机萃取溶剂选择乙青。

2.2色谱条件的优化

由于三氟乙酸的保留较弱，因此选择高容量的离子色谱交换色谱柱WY-Anion2阴离子分析柱。选用2.0mmol/LNa2CO3作为淋洗液，可以实现三氟乙酸与杂质离子的基线分离。/product.asp?action=search

2.3重现性、线性关系和检测限

在选定的色谱条件下，同一天内，连续测定11次同一浓度待测离子的溶液的相对标准偏差（RSD），以考察其稳定性。此时待测离子的色谱峰的保留时间和峰面积的相对标准偏差分别小于0.56%和1.68%；对连续5d待测离子的保留时间和峰面积的RSD分别小于1.06%和2.03%，从而验证了此方法应用于待测离子测定的稳定性和前处理方法的合理性。在较宽的浓度范围内线性关系良好，R2=0.9993，检测限为30.0以g/L，保证实际样品中待测离子检测的准确性。

2.4样品测定和回收率

对样品分别以高中低三个浓度进行了加标回收率实验，三种样品的加标回收率均在

95.7%?98.3%之间。图1为三氟乙酸标准品色谱图。图2为多肽样品色谱图。表1为样品测定结果及回收率数据。

图1.三氟乙酸标准品色谱图

色谱峰1,三藐乙酸（5.0）

图1.三氟乙酸标准品色谱图

色谱峰1,三藐乙酸（5.0）

ID

图Z多肽品色谱图

色谱峰：1,三氟乙酸

表1多肽药物中三氟乙酸的含量及回收率数据

加标量（iHS.L）

2.0

5.0

10.0

含量（mg/L）

1.47

1.47

1.47

测得值（mgL）

3.39

6.36

10.98

回收率（%）

97.7

98.3