高中生物第五章第二节多聚酶链式反应扩增NDA片段新人教版选修.ppt

第64页,共70页，2024年2月25日，星期天第65页,共70页，2024年2月25日，星期天第66页,共70页，2024年2月25日，星期天循环次数DNA数量12320303、30次循环后靶序列扩增的数量第67页,共70页，2024年2月25日，星期天循环次数DNA数量122438201,048,576301,073,741,8243、30次循环后靶序列扩增的数量第68页,共70页，2024年2月25日，星期天4、循环特点：第69页,共70页，2024年2月25日，星期天感谢大家观看第70页,共70页，2024年2月25日，星期天DNA合成的方向子链由5′端向3′端延伸第32页,共70页，2024年2月25日，星期天思考：DNA复制的前提是什么？体外扩增DNA如何打开双链？第33页,共70页，2024年2月25日，星期天DNA复制的前提是______________；用_________________方法思考：DNA复制的前提是什么？体外扩增DNA如何打开双链？第34页,共70页，2024年2月25日，星期天DNA复制的前提是______________；用_________________方法思考：DNA复制的前提是什么？体外扩增DNA如何打开双链？双链的解开第35页,共70页，2024年2月25日，星期天DNA复制的前提是______________；用_________________方法思考：DNA复制的前提是什么？体外扩增DNA如何打开双链？双链的解开控制温度第36页,共70页，2024年2月25日，星期天DNA分子的热变性原理：第37页,共70页，2024年2月25日，星期天DNA双链单链DNA分子的热变性原理：第38页,共70页，2024年2月25日，星期天DNA双链单链复性（缓慢冷却）DNA分子的热变性原理：变性（加热80-100℃）第39页,共70页，2024年2月25日，星期天DNA双链单链复性（缓慢冷却）变性的目的：复性的目的：DNA分子的热变性原理：变性（加热80-100℃）第40页,共70页，2024年2月25日，星期天DNA双链单链复性（缓慢冷却）变性的目的：复性的目的：解开双链有利于引物Ⅰ和引物Ⅱ与两条单链的结合DNA分子的热变性原理：变性（加热80-100℃）第41页,共70页，2024年2月25日，星期天思考：高温使DNA解旋，但普通DNA聚合酶会失活，__________________找到耐高温DNA聚合酶。第42页,共70页，2024年2月25日，星期天思考：高温使DNA解旋，但普通DNA聚合酶会失活，__________________找到耐高温DNA聚合酶。托马斯.布鲁克第43页,共70页，2024年2月25日，星期天体外DNA复制的条件(PCR反应的条件)第44页,共70页，2024年2月25日，星期天①DNA模板；②分别与两条模板链相结合的两种引物；③四种脱氧核苷酸；④耐高温的聚合酶；⑤控制温度，但不需解旋酶。体外DNA复制的条件(PCR反应的条件)第45页,共70页，2024年2月25日，星期天（三）PCR的反应过程1、PCR的反应步骤第46页,共70页，2024年2月25日，星期天1、PCR的反应步骤PCR一般经历三十多次循环，每次循环可以分为三个基本步骤──变性、复性和延伸（三）PCR的反应过程第47页,共70页，2024年2月25日，星期天①变性（模板DNA解旋）模板DNA加热至900C以上时，模板DNA双链解离，成为单链。2、循环过程第48页,共70页，2024年2月25日，星期天靶序列靶序列PCR循环第一步：加热变性第49页,共70页，2024年2月25日，星期天②复性（退火）温度下降到50℃左右，两种引物与模板DNA单链的互补序列配对结合。第50页,共70页，2024年2月25日，星期天PCR循环第二步：引物与靶序列退火第51页,共70页，2024年2月25日，星期天③延伸温度上升到72℃，在TaqDNA聚合酶的作用下，以脱氧核苷酸为原料，以母链为模板，按碱基互补配对的原则，合成一条新的DNA链第52页,共70页，2024年2月25日，星期天PCR循环第三步：引物延伸第53页,共70页，2024年2月25日，星期天靶序列靶序列第1个PCR循环完成后：得到两个拷贝的靶序列第54页,共70页，2024年2月25日，星期天