4--第二章色谱分离条件的选择.ppt

**第三节色谱分离条件的选择问题1：对于色谱而言，物质分离和哪些因素有关？答：1.物质是否能通过色谱得到分离取决于固定相与各组分分子之间相互作用的大小是否有区别。2.色谱分离操作过程中的操作条件（因素）的选择是否恰当。问题2：如何通过色谱流出曲线图来判断色谱分离中的两个组分分离是否完全？答：1.两组分色谱峰之间的距离足够大；2.两组分色谱峰峰形必须狭窄。可以用分离度R来判别物质的分离程度。一、分离度(R)定义：相邻两组分色谱峰保留值之差与两个组分色谱峰峰底宽度总和之半的比值。R＝(Y1+Y2)tR(2)－tR(1)12当两组分色谱峰分离较差，峰低宽度难于测量时，可用半峰宽度代替峰低宽度，即：R’＝(Y1/2(1)+Y1/2(2))tR(2)－tR(1)12固定液的热力学性质决定了两个组分保留值之间的差别。色谱过程中的动力学因素由峰宽来体现。所以分离度R既体现了热力学因素，又体现了动力学因素，是柱效能以及选择性影响因素的总和，可以作为色谱柱的总分离效能指标。R＝(Y1+Y2)tR(2)－tR(1)12当R＝0时，分离程度等于0，两物质根本不能分离；当R＝1时，分离程度可达98％；当R＝1.5时，分离程度可达99.7％，作为两峰分开的标志。分离度R可以作为相邻两个色谱峰实际分离程度的度量。R＝(Y1+Y2)tR(2)－tR(1)12二、色谱分离基本方程式色谱分析中，在选择合适的固定相及实验条件时，对于难分离的物质对，由于它们的保留值差别小，可合理的认为：峰宽Y1=Y2=Y，分配比k1=k2=k。R＝14√n*()αα-1*()1+kk其中：α是相对保留值r2,1，也叫柱子的选择因子，组分2与组分1的调整保留值之比，表示柱子对不同物质的选择性；k即分配比。由此可见，分离度R与α、n、k有关。这样可以推出色谱分离基本方程：R＝14√n*()αα-1*()1+kkα＝r2,1＝tR2’tR1’k＝＝tR－tMtMtR’tMn=5.54()2=16(-)2tRY1/2tRY由此可见，分离度R可由色谱流出曲线图计算得出。色谱分离基本方程：其中：理论塔板数与有效塔板数之间关系为：n=()2*n有效1＋kk有效塔板数表示的色谱分离基本方程为：R＝14√n有效*()αα-1R＝14√n*()αα-1*()1+kk影响分离度的因素：1.分离度与色谱柱柱效n之间的关系（柱效因子n）R＝14√n*()αα-1*()1+kk分离度R与n的平方根成正比。当固定相确定，亦即被分离物质对的相对保留值α值确定，欲达到一定的分离度，将取决于n，n大，R大。所以增加被分离物质对的分离度，可采用加大塔板数的方法。分析：所以增大n的方法有两个：加长柱子长度L或者减小塔板高度H。n=L/H增加被分离物质对的分离度R，可采用加大塔板数n的方法如何加大塔板数n？减小塔板高度H意味着要制备一个性能优良、柱效好的柱子，并在最优化条件下进行操作。但k增大，固定相对组分的溶解或吸附就多，分析时间就会延长，峰宽产生扩展；k增加到一定程度后，k/(1+k)变化不明显。R＝14√n*()αα-1*()1+kkk,k/(1+k)=1-1/(1+k),R2.分离度与容量比k之间的关系（容量因子k）容量因子k即分配比分析：所以k一般在1～10范围内。相比β改变，β=VM/VS，VM减小，β减小，由K=kβ，k增大。即采用细颗粒的固定相，填充紧密均匀，减小柱子死体积。k,k/(1+k)=1-1/(1+k),R改变k值方法：改变柱温、改变相比。柱温改变，分配系数K改变，K=kβ，则k改变；3.分离度与柱选择性之间的关系（选择因子α）相对保留值α是柱选择性的量度，α越大，柱选择性越好，分离效果越好。R＝14√n*()αα-1*()1+kk注意，α是大于或等于1的，等于1，则分离不能实现。2.在一定分离度下，大的α值可在有效理论塔板数小的色谱柱上实现分离。3.当α值为1时，分离所需的有效理论塔板数为无穷大。故分离不能实现。4.当α值相当小的情况下，特别是α<1.1时，实现分离所需的有效理论塔板数很大，此时应当是增大α值。5.如果相邻两峰的α