(47)--8.2.1 发酵液的预处理和固液分离-发酵液的预处理目的和要求.ppt

8发酵液预处理及发酵产物提取与精制

8.2发酵液的预处理和固液分离

在生物技术实验室和生物制品实践中，接触最多的、最直接的就是发酵液预处理固液分离

8.2.1内容1：为什么要对发酵液进行预处理？内容2：典型的预处理方法发酵液及产物的特性凝聚与絮凝

含水量高产物浓度低悬浮物颗粒小液体粘度大产物不稳定一、为何要进行发酵液的预处理？---发酵液及产物的特性

1去除发酵液中部分杂质，以利后续各步操作。发酵液预处理的目的改变发酵液的物理性质，促进悬浮液中分离固形物的速度，提高固液分离器的效率。2尽可能使产物转入便于后处理的某一相中（多数是液体）3

发酵液预处理要求ClicktoaddTitle1菌体分离1ClicktoaddTitle2固体悬浮物去除2ClicktoaddTitle1杂蛋白去除3ClicktoaddTitle2重金属离子去除4ClicktoaddTitle1色素、毒物去除等5

二、发酵液预处理方法（一）改变发酵液的可过滤性

降低发酵液粘度（1）（2）调整pH1.改善发酵液的可过滤性pH值直接影响发酵液中某些物质的电离度和电荷性质，调节pH值可改善其过滤特性。根据流体力学原理，滤液通过滤饼的速率与液体的粘度成反比，降低液体粘度（加水稀释法和加热法等）可有效提高过滤速率。注意加热温度与时间，不影响产物活性和细胞的完整性。

（3）凝聚与絮凝

A.凝聚憎水胶体颗粒在溶液中以稳定的分散态存在的原因扩散层固定层滑动界面ξ电位双电层排斥电位

Al3+>Fe3+>H+>Ca2+>Mg2+>K+>Na+>Li+反离子价数越高，凝聚力越强阳离子对带负电荷的胶粒凝聚能力的次序为：硫酸铝Al2(SO4)3?18H2O（明矾）；氯化铝AlCl3?6H2O;三氯化铁FeCl3;硫酸亚铁FeSO4·7H2O；石灰；ZnSO4；MgCO3常用的凝聚剂电解质有凝聚(Coagulation)凝聚：发酵液中加入电解质，使细胞、菌体或蛋白质等胶体粒子双电层排斥电位降低，使胶粒之间从不易聚集分散状态，变成易于聚集，从而沉淀下来。

缺点：凝聚体颗粒较小

B.絮凝(flocculation)絮凝剂是一种能溶于水的高分子长链结构聚合物，其相对分子质量可高达数万至一千万以上。其链节上含有许多活性官能团，包括带电荷的阴离子或阳离子基团以及不带电荷的非离子型基团。它们通过静电引力、范德华力、氢键或配位键的作用，强烈地吸附在胶粒的表面。原理

絮凝(flocculation)絮凝剂是一种能溶于水的高分子长链结构聚合物，其相对分子质量可高达数万至一千万以上。其链节上含有许多活性官能团，包括带电荷的阴离子或阳离子基团以及不带电荷的非离子型基团。它们通过静电引力、范德华力、氢键或配位键的作用，强烈地吸附在胶粒的表面。原理当一个高分子聚合物的许多链节分别吸附在不同的胶粒表面上，产生桥架联结时，就形成了较大的絮团，这就是絮凝作用。过程

胶体颗粒絮凝剂吸附絮凝团

1）高分子聚合物：如聚丙烯酰胺类衍生物、聚苯乙烯类衍生物；2）无机盐类：如聚合铝盐、聚合铁盐等；3）天然有机高分子絮凝剂，如聚糖类胶粘物、海藻酸钠、明胶、骨胶、壳多糖、脱乙酰壳多糖等。工业上使用的絮凝剂可分为三类聚丙烯酰胺类、聚苯乙烯类和聚乙烯亚胺类衍生物根据活性基团在水中解离情况不同，可分为三类：非离子型阴离子型（含有羧基）阳离子型（含有胺基）目前最常见的高分子聚合物絮凝剂

（1）絮凝剂浓度浓度增加有助于架桥充分，但过量会引起吸附饱和，使胶粒再次稳定。（2）絮凝剂分子量分子量过大影响絮凝剂的水溶性，进而影响絮凝效果（3）溶液pH值影响絮凝剂中功能基团的电离度，从而影响分子链的伸展状态（4）搅拌速度搅拌速度适中，过快则将絮凝团打碎影响絮凝效果的因素

絮凝剂加量对絮凝效果(滤速)的影响料液中，絮凝剂浓度增加有助于架桥充分，但是过多的加量反而会引起吸附饱和，在每个胶粒上形成覆盖层而使胶粒产生再次稳定现象。

发酵液pH对阴离子聚丙烯酰胺絮凝效果的影响溶液pH的变化常会影响离子型絮凝剂中功能团的电离度，从而影响分子链的伸展形态。电离度增大，由于链节上相邻离子基团间的电排斥作用，而使分子链从卷曲状态变为伸展状态，所以架桥能力提高。

案例β-半乳糖苷酶发酵液处理乙酰壳多糖+聚乙烯亚胺+氯化钙，分别在细胞破碎前后处理发酵液，结果：1、提高离心分离后的澄清度，细胞碎片的去除率提高10倍2、部分可溶性蛋白质凝固，总蛋白含量降低40%3、β-半乳糖苷酶活性未受影响絮凝(flocculation)

电解质双电层排斥电位降低凝聚在中性盐作用下，由于菌体细胞等双电层排斥电位的降低，而使胶体体系不稳定的状态。凝聚与絮凝

电解质双电层排斥