生物化学公开课-酶化学.ppt

①临床上低温麻醉是利用酶的性质减慢组织细胞代谢速度，提高机体对氧和营养物质缺乏的耐受性。②保存菌种。③生化实验中测定酶的活性，应严格控制反应液的温度。④酶制剂应保存在冰箱中，取出应立即应用，以免变性。3、应用：当反应系统中底物的浓度足够大时，酶促反应速度与酶浓度成正比，即ν=k[E]。?0[E]六、酶浓度对反应速度的影响1．反应速度与酶浓度成正比当反应系统中底物的浓度足够大时，酶促反应速度与酶浓度成正比，即ν=k[E]。六、酶浓度对反应速度的影响1．反应速度与酶浓度成正比2．V与[E]关系的几点讨论七、激活剂对酶反应速度的影响什么是激活剂（activator）?酶的激活剂：凡能提高酶活性的简单化合物。1.无机离子（1）一些金属离子，如Na+、K+、Mg2+、Ca2+、Cu2+、Zn2+、Fe2+等。①专一性②有的金属离子可以互相替代③有的离子间有拮抗作用（2）阴离子：如Cl-、Br-、I-、CN-等（3）氢离子④酸碱催化（acid-basecatalysis）狭义的酸碱催化剂：H+和OHˉ的催化广义的酸碱催化剂：质子供体和质子受体的催化（氨基、羧基、巯基、酚羟基、咪唑基等）⑤酶活性中心的微环境效应（二）某些酶的活性中心及作用原理胰凝乳蛋白酶分子中催化三联体构象His57Asp102Ser195Asp102His57Ser195His57102AspSer195A.酶分子中的电荷中继网B.加上底物后，从Ser转移一个质子给His，带正电荷的咪唑基通过带负电荷的Asp静电相互作用被稳定Ser195102AspHis57底物胰凝乳蛋白酶反应的详细机制（1）结合底物His57质子供体形成共价ES复合物C-N键断裂底物胰凝乳蛋白酶反应的详细机制（2）羰基产物释放四面体中间物的瓦解水亲核攻击羧基产物释放第三节酶促反应动力学（kinetics）什么是动力学？什么是酶作用动力学？研究酶促反应的速度规律以及各种因素对反应速度的规律的影响,其中酶与底物之间作用问题是研究酶促反应的核心问题.产物浓度/[P]酶的反应过程曲线1、反应的初速度（初始速率）是底物转化量5%时的反应速率。时间/t斜率=[P]/t=V（初速率）2、影响酶的反应速度的因素酶浓度、底物浓度、pH值、温度、反应产物、激活剂和抑制剂等因素。一、酶反应速度及初速度斜率=[P]/t=V（初速度）[P]t1、反应的初速率（初始速率）是底物转化量5%时的反应速率。2、影响酶的反应速率的因素酶浓度、底物浓度、pH值、温度、反应产物、激活剂和抑制剂等因素。一、酶反应速度及初速度（一）中间络合物学说二、底物浓度对反应速率的影响(二)酶促反应动力学方程1913年Michaelis和Menten推导了米氏方程.1．米氏方程的推导稳态法推导：1925年Briggs和Haldame对米氏方程作了一次重要的修正，提出了稳态的概念。所谓稳态是指反应进行一定时间后，ES的生成速度和ES的分解速度相等，亦即ES的净生成速度为零，此时ES的浓度不再改变，达到恒态，也称稳态。根据中间产物学说，酶促反应分两步进行:米氏方程的推导：(二)米氏方程的讨论1.方程表明了酶反应速率与底物之间的定量关系；2.当底物浓度低时，[S]比Km小得多时，反应呈一级。3.[S]比Km大得多时，，反应速率达到最大值，反应呈零级。4.当?=Vmax／2时，Km=[S]。因此，Km等于酶促反应速率达最大值一半时的底物浓度。=Vmax[S]Km+[S]Vmax21、Km的含义（等于酶促反应速度达最大值一半时的底物浓度）。2、是酶在一定条件下的特征物理常数，通过测定Km的数值，可鉴别酶。3、Km可用来判断酶的最适底物(天然底物)。4、Km可以反映酶与底物亲和力的大小。Km越小，酶与底物的亲和力越大。（三）Km的意义E+Sk1k2k3ESE+Pk2+k3k1Km==Ks5、Km与Ks6、①若已知酶的Km值,可计算某一底物浓度时,反应速率相当于V