尼古丁在新生大鼠耳蜗毒性机制及17-DMAG的保护作用.docVIP

尼古丁在新生大鼠耳蜗毒性机制及17-DMAG的保护作用

第一部分：SD大鼠乳鼠耳蜗器官体外培养技术目的：探讨内耳器官培养技术使毛细胞、螺旋神经元及听神经纤维在体外培养环境维持完整形态,为进一步开展药物的耳毒性及其保护性研究奠定了实验技术的基础。方法：选用SpragueDawley大鼠2-3天的新生乳鼠,解剖显微镜下解剖分离前庭器官膜、外侧壁、基底膜。

将基底膜分成三段,顶、中、底回三个节段,利用培养基的液体表面张力铺放将基底膜和前庭器官等各个器官,平整向上平整铺放在培养皿表面,培养48小时后观察基底膜形态并计数毛细胞数量。结果：前庭毛细胞和耳蜗毛细胞静纤毛整齐排列,无紊乱,前庭毛细胞排列整齐无缺失,基底膜三个节段的三排外毛细胞和一排内毛细胞沿柯替氏器螺旋器(OC,OrganofCorti)整齐排列,无缺失。

螺旋神经结细胞排列密集,呈椭圆形,细胞体积大,胞核清晰,听神经纤维排列整齐,无断裂。结论：运用液体表面张力贴壁方法,可以在体外环境下获得观察方便、形态结构完整的的耳蜗器官和组织。

第二部分：尼古丁对新生大鼠体外培养基底膜的毒性作用目的：建立尼古丁耳毒性的体外培养损伤模型,探讨尼古丁在耳蜗毛细胞、螺旋神经结细胞和神经纤维及的毒性作用及剂量反应关系。方法：分离培养2-3天SD大鼠耳蜗基底膜,按照不同作用浓度(0-100ng/ml)处理尼古丁24小时。

对耳蜗毛细胞和螺旋神经