重组子的筛选.pptVIP

2.过程第63页,共90页，2024年2月25日，星期天四、杂交释放转译法1.原理：在高甲酰胺溶液中载体上克隆的cDNA与它的mRNA杂交吸附，然后洗脱，释放出与它对应的mRNA，进行体外转录。研究其转录产物的性质是否是预期的基因产物（如分子量、免疫源性等）。第64页,共90页，2024年2月25日，星期天2.过程硝酸纤维素滤膜载体和插入的cDNA总mRNAcDNA基因的mRNA杂交洗脱cDNA基因的mRNA体外翻译cDNA编码的蛋白电泳凝胶放射自显影cDNA编码的蛋白硝酸纤维素滤膜载体和插入的cDNA硝酸纤维素滤膜载体和插入的cDNA收集35S标记的氨基酸第65页,共90页，2024年2月25日，星期天专门设计检测能同DNA特异结合的蛋白质因子。待测蛋白质硝酸纤维素滤膜能与蛋白质结合的DNA序列放射性标记待测蛋白质硝酸纤维素滤膜能与蛋白质结合的DNA序列放射性标记五、DNA-蛋白质相互作用筛选法第66页,共90页，2024年2月25日，星期天一般克隆与筛选策略第67页,共90页，2024年2月25日，星期天第七节几种常用的真核生物重组基因选择方法真核细胞核苷酸的合成需要四氢叶酸提供甲基。二氢叶酸