超敏反应性疾病的免疫学检验.pptVIP

感谢大家观看第94页,共94页，2024年2月25日，星期天目前公认的检测I型超敏反应方法之一；具有特异性强、敏感性高；影响因素少、对患者绝对安全等优点；过敏性哮喘诊断；寻找变应原。缺点：费用昂贵、花费时间长、不同试剂盒的参比血清不同不易相互比较。二、特异性IgE的检测第62页,共94页，2024年2月25日，星期天第63页,共94页，2024年2月25日，星期天第三节免疫复合物检测第64页,共94页，2024年2月25日，星期天抗原特异性循环免疫复合物利用免疫复合物中抗原特异性来测IC。优点：特异性高；缺点：需制备专一的针对抗原的抗体，只能检测特定的一种IC，不常用。（免疫复合物中的抗原性质不太清楚或非常复杂）第65页,共94页，2024年2月25日，星期天抗原非特异性免疫复合物检测不考虑免疫复合物中抗原的性质，只检测免疫复合物的总量。根据检测原理不同，检测技术分为：1.物理法－PEG法2.补体法－C1q结合试验3.抗球蛋白法－mRF固相抑制试验4.细胞法－Raji细胞试验第66页,共94页，2024年2月25日，星期天CIC：分子量600kDa以上，沉降系数＞19S；热聚合人IgG(heatagglutinationhumanIgG,HAHG)：作为参考标准品，绘制标准曲线进行CIC定量或测定A值代表CIC相当于HAHG的含量。一、抗原非特异性CIC检测技术第67页,共94页，2024年2月25日，星期天一、抗原非特异性CIC检测技术CIC的检测方法：按抗体分子在结合抗原后发生的物理学和生物学特性的改变而设计。①PEG比浊法;②ELISA法;③细胞法——Raji细胞法;④抗球蛋白技术—mRF凝胶扩散试验。第68页,共94页，2024年2月25日，星期天一、抗原非特异性CIC检测技术PEG比浊法：1.基本原理聚乙二醇（polyethyleneglycol,PEG）为不带电荷、直链大分子结构的多糖，有强脱水作用，利用2%～4%浓度的PEG可选择性沉淀大分子CIC。2.技术要点生物化学检验。第69页,共94页，2024年2月25日，星期天3.注意事项：①2%PEG沉淀大分子CIC；②4%PEG沉淀较小分子CIC；③超过5%PEG选择性沉淀CIC的特性消失；④温度影响极大，需进行温差校正；⑤低密度脂蛋白使浊度增加，空腹采血；⑥高γ球蛋白血症和标本反复冻融浊度增加。一、抗原非特异性CIC检测技术PEG比浊法：第70页,共94页，2024年2月25日，星期天一、抗原非特异性CIC检测技术ELISA法：1.基本原理ELISA法测定的CIC，是能够结合C1q的IgG类抗体与其特异性抗原形成的CIC。2.技术要点将聚苯乙烯包被上C1q，加入受检血清，CIC中IgG的Fc段与C1q结合，再加抗人IgG·HRP，形成C1q-CIC-抗人IgG·HRP复合物，加底物显色。第71页,共94页，2024年2月25日，星期天一、抗原非特异性CIC检测技术①灵敏度高于PEG比浊法，检测到0.1mg/L，重复性好等优点；②C1q制品不易精制,纯品不稳定，只能检出与补体结合的CIC。ELISA法：第72页,共94页，2024年2月25日，星期天一、抗原非特异性CIC检测技术细胞法-Raji细胞法：1.基本原理Raji细胞是从Burkitt淋巴瘤分离建株似B细胞系，在体外繁殖传代，细胞表面有高密度的C1q、C3b、C3d等补体受体，而且不易脱落。第73页,共94页，2024年2月25日，星期天2.技术要点将一定量待检血清、HAHG和Raji细胞混合，使补体、CIC或HAHG与Raji细胞形成复合物，加入抗人IgG·FIC，形成Raji细胞—补体—CIC(或HAHG)—抗人IgG·FIC复合物，检测荧光强度。一、抗原非特异性CIC检测技术细胞法-Raji细胞法：第74页,共94页，2024年2月25日，星期天3.影响因素①培养条件能改变Raji细胞其表面受体的数量及亲和性，影响检测敏感性;②待检血清中如有抗淋巴细胞的抗体，能和Raji细胞反应;③SLE血清中的抗DNA也能和Raji细胞反应，使测定结果偏高。一、抗原非特异性CIC检测技术细胞法-Raji细胞法：第75页,共94页，2024年2月25日，星期天4.方法评价①敏感性高(6mg/LHAHG)，实用性强；②缺点需培养Raji细