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sAPRIL结合肽提高结直肠癌LOVO细胞对5--FU的敏感性的实验研究的开题报告

一、选题背景

结直肠癌是常见的消化道恶性肿瘤之一，其病因复杂，发病率逐年上升。化疗是结直肠癌治疗的重要手段之一，5-氟尿嘧啶（5-FU）是一种广泛应用于结直肠癌化疗的药物，但由于其耐药性等限制，导致效果不太理想。因此，探索新的方法提高结直肠癌细胞对5-FU的敏感性，是目前该领域研究的热点和难点之一。

sAPRIL（solubleapoptosis-associatedspeck-likeproteincontainingaCARD）是一种细胞因子，其参与肿瘤细胞凋亡的调控过程。前期研究数据显示，sAPRIL对结直肠癌细胞株HCT15的增殖和生存具有明显的抑制作用。但是，sAPRIL是否可以提高结直肠癌细胞对5-FU的敏感性尚未明确。

因此，本研究旨在探究sAPRIL结合肽（sAPRILbindingpeptide，ABP）对结直肠癌LOVO细胞对5-FU的敏感性调控作用，为进一步完善结直肠癌化疗方案提供理论依据。

二、研究目的

本研究旨在探究sAPRIL结合肽对结直肠癌LOVO细胞株对5-FU的敏感性调控作用，为提高结直肠癌化疗效果提供新的思路和方法。

三、研究内容及方法

1.研究内容

（1）构建sAPRIL结合肽（ABP）表达质粒，将其转染入结直肠癌LOVO细胞株中。

（2）参照前期研究方法，采用MTT法、AnnexinV/PI法和Westernblot法等多种方法，比较sAPRIL结合肽对LOVO细胞的生长、凋亡以及caspase3和p-AKT表示量的影响。

（3）采用流式细胞术法，直接检测sAPRIL结合肽联合5-FU对LOVO细胞凋亡率的影响，进一步验证sAPRIL结合肽对LOVO细胞对5-FU的敏感性调控作用。

2.研究方法

（1）构建sAPRIL结合肽表达质粒：将sAPRIL结合肽序列克隆入表达质粒中，并通过酶切、测序等方法验证其正确性。

（2）转染：将表达质粒转染入LOVO细胞中，采用Westernblot法确认转染效果。

（3）MTT法：检测细胞增殖情况，进一步验证sAPRIL结合肽对细胞生存的影响。

（4）AnnexinV/PI法：采用流式细胞术检测细胞的凋亡情况。

（5）Westernblot法：检测caspase3和p-AKT等相关蛋白质表达量的变化。

（6）流式细胞术：直接检测sAPRIL结合肽联合5-FU对LOVO细胞凋亡率的影响。

四、预期结果

研究结果预计有以下几点：

（1）构建了sAPRIL结合肽表达质粒，并将其成功转染入LOVO细胞中。

（2）sAPRIL结合肽对LOVO细胞的增殖和生存具有一定的抑制作用。

（3）sAPRIL结合肽可以通过调控caspase3和p-AKT等相关蛋白质的表达量，促进LOVO细胞的凋亡。

（4）sAPRIL结合肽可以提高结直肠癌LOVO细胞对5-FU的敏感性。