细胞凋亡的流式细胞术检测.pptVIP

2.6DNA碎片分析：Apo-BrdU核酸内切酶活化使核小体内DNA断裂为50~300kb片段，裂解为200bpDNA碎片，暴露出多个3’羟基末端。利用外源性TdT使外源性dUTP或BrdUTP连接到DNA碎片的3羟基末端。以荧光标记抗dUTP或抗BrdUTP抗体检测dUTP或BrdUTP数量，从而间接检测凋亡加PI染色，在定量检测凋亡细胞同时显示凋亡细胞在细胞周期中所位置第22页,共32页，2024年2月25日，星期天在此法中，细胞固定先用甲醛，再用乙醇因为在凋亡细胞中可以检测出两群DNA：一群是低分子量的DNA(100~200bp)，弥散分布在凋亡细胞另一群是高分子量的DNA或仍然黏附在核基质上的DNA，乙醇固定后冲洗不能将其从细胞中洗去。第23页,共32页，2024年2月25日，星期天用树碱(CPT)诱导HL-60细胞凋亡，0、120和150分钟时用TUNEL(BrdUTP)/PI双染法检测DNA断裂，同时分析细胞周期。可见凋亡随着诱导时间的增加而增多，且可知凋亡发生的时相。第24页,共32页，2024年2月25日，星期天此方法灵敏度高、特异性好，目前己被广泛采用。由于DNA断裂发生在细胞凋亡的早期阶段，先于其形态学上的改变，可用于早期凋亡的研究。通过与PI双