胶体金技术完整版本.pptVIP

免疫胶体金技术一什么是胶体二什么是胶体金三胶体金的发现四胶体金的基本原理五胶体金的制备六胶体金的制备方法七胶体金的优点八胶体金技术在免疫学中的应用九免疫胶体金技术在兽医学中的应用什么是胶体胶体（英语：Colloid）又称胶状分散体（colloidaldispersion）是一种均匀混合物，在胶体中含有两种不同相态的物质，一种分散，另一种连续。分散的一部分是由微小的粒子或液滴所组成，大小介于1到100纳米之间，且几乎遍布在整个连续相态中。什么是胶体金由氯金酸（HAuCL4)在还原剂作用下，聚合成为特定大小（1~150nm）的金颗粒，并由静电作用成为一种稳定的胶体状态，称为胶体金。免疫胶体金技术用胶体金颗粒标记抗原或抗体，进行抗体或抗原的检测或定位分析的一种方法。胶体金的发现1857年，法拉第用还原法从氯金酸（HAuCl4）水溶液中制备胶体金，并发现在其中加入少量电解质后，可使胶体金由红色变为蓝色，最终凝集成无色，而加入明胶或其他大分子物质便可阻止这种变化，他的重大发现奠定了胶体金制备和应用的科学基础。直至1971年FaulkWP等将胶体金引入免疫化学，此后免疫胶体金技术作为一种新的免疫学方法，在生物医学领域得到了日益广泛的应用。胶体金的基本原理胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。胶体金标记，实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程胶体金的制备胶体金是通过在氯金酸水溶液中加入还原剂使之还原并聚集形成胶体金粒子而形成的。使用不同种类、不同剂量的还原剂，可以控制所产生的粒子大小，即粒子的大小取决于反应溶液中最初还原试剂和还原核的数量还原剂浓度越高，核浓度也越高，氯金酸水溶液的还原也就从更多的还原中心开始，因此产生的胶体金粒子数量越多，体积也越小。粒子直径每增加1倍，数量减为原来的1/8胶体金的制备方法根据不同的还原剂可以制备大小不同的胶体金颗粒。常用来制备胶体金颗粒的方法如下1．枸橼酸三钠还原法2．鞣酸—枸橼酸钠还原法3.抗坏血酸还原法4.硼氢化钠还原法5.乙醛超声波还原法1．枸橼酸三钠还原法（1）10nm胶体金粒的制备：取0.01％HAuCl4水溶液100ml，加入1％枸橼酸三钠水溶液3ml，加热煮沸30min，冷却至4℃，溶液呈红色。（2）15nm胶体金颗粒的制备：取0.01％HAuCl4水溶液100ml，加入1％枸橼酸三钠水溶液2ml，加热煮沸15min～30min，直至颜色变红。冷却后加入0.1Mol/LK2CO30.5ml，混匀即可。（3）15nm、18nm～20nm、30nm或50nm胶体金颗粒的制备：取0.01％HAuCl4水溶液100ml，加热煮沸。根据需要迅速加入1％枸橼酸三钠水溶液4ml、2.5ml、1ml或0.75ml，继续煮沸约5min，出现橙红色。这样制成的胶体金颗粒则分别为15nm、18～20nm、30nm和50nm。2．鞣酸—枸橼酸钠还原法A液：1％HAuCl4水溶液1ml加入79ml双馏水中混匀。B液：1％枸橼酸三钠4ml，1％鞣酸0.7ml，0.1Mol/LK2CO3液0.2ml，混合，加入双馏水至20ml。将A液、B液分别加热至60℃，在电磁搅拌下迅速将B液加入A液中，溶液变蓝，继续加热搅拌至溶液变成亮红色。此法制得的金颗粒的直径为5nm。胶体大小与呈色 胶体大小胶体颜色 2～5nm橙黄色10～20nm酒红色30～80nm紫红色橙红色—————紫红色小—————大另外，根据胶体金对光吸收峰的波长范围的不同，也可鉴别胶体金粒径（nm）1％柠檬酸三钠加入量（ml）呈色λmax162.00橙色518nm24.51.50橙红522nm411.00红色525nm71.50.70紫色535nm制备高质量胶体金的注意事项（1）玻璃器皿必须彻底清洗，最好是经过