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ABIPrism®7300型荧光定量PCR仪
安装培训
美国应用生物系统中国公司
技术服务部
2004年
1
培训内容
1、仪器简况
2、定量PCR的数学原理
3、定量PCR的化学原理
4、等位基因鉴定原理
5、定量PCR实验操作
6、定量PCR的数据处理
7、应用举例
2
仪器简况
7300功能一览
•绝对定量(AbsoluteQuantification，AQ)
–自动计算基线、阈值、C值、浓度、百分比
T
•相对定量(RelativeQuantification，RQ)
–RQPlate：控制实验
–RQStudy：计算数据，最多10块RQPlates
•等位基因分型(AllelicDiscrimination，AD)
•阴性阳性鉴定(Plus/MinuswithIPC，+/-)
4
7300选用的荧光组合
报告荧光(FilterA)FAM™或SYBR®Green
报告荧光(FilterB)VIC™或JOE™
淬灭或报告荧光(FilterC)TAMRA™或NED™
参比荧光(FilterD)ROX™
5
相对定量数据自动处理
选配软件
6
定量PCR的数学原理
PCR曲线有两种表达形式
线性图谱对数图谱
8
PCR分4个阶段
平台期
线性增长期
指数增长期
基线期
9
起点定量与终点定量
起始DNA量是“天然”的量，更有意义；终点DNA
量是经过PCR“加工”的量，存在部分“失真”
起点定量重现性好，终点定量误差大
终点：误差大
同一个样品重复96次
起点：重现性好
10
C值测定起始DNA浓度
T
定义：从基线到指数增长的拐点所对应的循环次数
C值必须位于指数增长阶段内
T
线性图谱半对数图谱
C值C值
TT
11
标准曲线
CT=-klogX0+b
C
T
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