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ICS65.020.01
CCSB61
DB23
黑龙江省地方标准
DB23/TXXXX—XXXX
红松无性系SSR鉴别技术规程
（征求意见稿）
主要起草单位：东北林业大学
联系人：张含国
联系电话
邮箱：hanguozhang1@
XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施
黑龙江省市场监督管理局发布
DB23/TXXXX—XXXX
红松无性系SSR鉴别技术规程
1范围
本标准规定了利用简单重复序列（Simplesequencerepeat,SSR）对红松（Pinuskoraiensis）无性系鉴别
技术规程的范围、规范性引用文件、术语和定义、仪器设备及试剂、溶液配制、引物信息、操作程序、数
据记录与统计、判定规则。
本标准适用于红松无性系的SSR指纹数据采集及品种鉴定，家系等可参考本标准。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改章节）适用于本文件。
GB/T6682中国实验室用水国家标准
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
红松无性系
从红松天然群体或人工杂交、诱变群体中，选择优良单株，通过无性繁殖得到的红松品系。
3.2
参照无性系
具有SSR位点上不同等位变异的红松无性系，用于辅助确定送检样品的等位变异，校正仪器设备的系
统误差。
3.3
核心引物
红松无性系鉴定中优先选用的一套SSR引物，具有多态性高、重复性好等综合特性。
4技术原理
由于不同红松无性系遗传组成不同，基因组DNA中简单重复序列的重复次数存在广泛差异，这种差
异可以通过PCR扩展及电泳方法进行检测，从而能够区分不同红松无性系。
5仪器设备及试剂
见附录A。
6溶液配制
见附录B。
7引物信息
1
DB23/TXXXX—XXXX
核心引物名单及序列见附录C。
8操作程序
8.1样品制备
送检样品宜为一年生针叶，-80℃超低温冷冻保存。同一红松无性系样品数应大于5个。
8.2DNA提取
CTAB提取法：新鲜针叶200mg~300mg，置于研钵中，加液氮充分研磨，移入2.0mL离心管；每管
加入700μL65℃预热的CTAB提取液后，充分混合，65℃保温60min期间多次颠倒混匀；每管加入等体
积的三氯甲烷/异戊醇混合液，充分混合后，静置10min；12000g离心15min后，吸取上清液至一新离心
管,再加入等体积预冷的异丙醇，颠倒离心管数次，在-20℃放置30min；4℃，12000g离心10min，弃上
清液；加入70%乙醇，旋转离心管数次，弃去乙醇；将离心管倒立于热有滤纸的实验台上，室温干燥沉淀；
加入100μL超纯水或TE缓冲液，1%琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量，并进行浓度测定，稀释至20ng/μL
充分溶解后备用。
试剂盒提取法：使用经验证适合SSR指纹技术的商业试剂盒，按照试剂盒的使用说明操作。
8.3PCR扩增
8.3.1引物选择
应选
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