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残留农药检测方法免疫分析法残留农药检测方法免疫分析法第1页

一、免疫学基础知识1.抗原抗原（antigen,Ag）是一类能够引发机体特异性免疫应答，并能与对应抗体或T细胞受体发生特异反应物质。抗原含有以下两种特征：①免疫原性，即诱导刺激免疫系统产生抗体或者激活淋巴细胞产生免疫应答能力，含有这种特征物质称为免疫原；残留农药检测方法免疫分析法第2页

②抗原性（antigenicity)，指与抗体反应性质，这种结合反应含有特异性。抗原这两种特征是不一样，含有免疫原性物质必定有抗原性，反之则不一定成立。含有上述两种特征物质称为完全抗原，只含有抗原性物质称为半抗原，它能与抗体结合但不能诱导机体产生免疫应答.残留农药检测方法免疫分析法第3页

2.抗体（antibody,Ab)机体受抗原刺激后，在体液中出现一个能与对应抗原发生特异性结合球蛋白，因其含有免疫活性，习惯上称为免疫球蛋白.残留农药检测方法免疫分析法第4页

4.抗原抗体反应抗原与抗体相互作用是免疫学基础，二者经过大量非共价键连接，包含静电力、氢键、疏水作用和范德华力等。抗原和抗体在体内进行反应称为免疫反应，在体外进行反应称为血清学反应。残留农药检测方法免疫分析法第5页

5.免疫分析免疫分析方法是研究免疫学工具。免疫分析是基于抗原抗体之间特异性相互作用从而实现反抗原、抗体或相关物质进行分析检测方法。免疫反应高选择性、高亲和性和高灵敏性为免疫分析可靠和准确提供了确保。残留农药检测方法免疫分析法第6页

从本质上讲，几乎全部免疫分析都是基于识别位点占据率测定，依据这种反应性质可分为竞争免疫分析和非竞争免疫分析。残留农药检测方法免疫分析法第7页

二、酶联免疫吸附分析法1971年瑞典学者Engvail和Perlmann,荷兰学者VanWeerman和Schuurs分别报道将免疫技术发展为检测体液中微量物质固相免疫测定方法，即酶联免疫吸附测定法(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)。ELISA现在已成为当前分析化学领域中前沿课题，它是一个特殊试剂分析方法，是在免疫酶技术(immunoenzymatictechniques)基础上发展起来一个新型免疫测定技术。残留农药检测方法免疫分析法第8页

酶联免疫吸附分析法（ELISA）集抗原抗体反应高灵敏性和强特异性于一体，表现出简单、快速、灵敏和选择性高等优势，在20世纪80年代得到了快速发展，尤其在农药残留测定方面表现最为活跃。采取EIJSA法不但能够定性，而且能够定量，使用多孔滴定板，一次可进行大批量样品测定。残留农药检测方法免疫分析法第9页

已商品化筛选农药残留EIASA试剂盒种类很多，不但能用于各种食品和各种环境样品中杀虫剂、杀菌剂、除草剂分析，而且也能检测各种环境污染物，如多氯联苯、多环芳烃，以及黄曲霉素等各种天然毒素。ELISA一次只能检测单一农药或结构近似少数几个农药，不能处理农药多残留分析问题。而且抗体制备难度较大。残留农药检测方法免疫分析法第10页

当前抗体数量还较少；分析会受到特异性或非特异性干扰；假如在不能必定试样中农药品种情况下，检测含有一定盲目性；另外有可能出现假阳性或假阴性现象等等。伴随技术日趋成熟，ELISA在农药残留速测中应用会得到新发展。残留农药检测方法免疫分析法第11页

1.基础原理将抗原或抗体固定于适当载体上，并保持其生物活性．使抗原或抗体与某种酶连接．这种酶标抗原或抗体同时其有免疫活性和酶活性；待测样品和酶标抗原或抗体与包被抗原或抗体经过一系列反应；用洗涤方法将固相载体上复合物与其它物质分离；加入酶反应底物，复合物上酶催化底物使其水解，氧化或还原成有色产物，一定条件下，产物色泽与待测物含量直接相关，依据颜色反应深浅对待测物进行定性或定量分析。测定对象能够是抗体也能够是抗原。残留农药检测方法免疫分析法第12页

底物显色定性或定量分析原理包被反应加入待测抗体或抗原和酶标抗原或抗体洗涤使结合在固相上抗原抗体复合物与未结合分离1234残留农药检测方法免疫分析法第13页

在这种测定方法中有3种必要试剂：①固相抗原或抗体（免疫吸附剂）②酶标识抗原或抗体（标识物）③酶作用底物（显色剂）残留农药检测方法免疫分析法第14页

测量时，抗原（抗体）先结合在固相载体上，但仍保留其免疫活性，然后加一个抗体（抗原）与酶结合成偶联物（标识物），此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性，当偶联物与固相载体上抗原（抗体）反应结合后，再加上酶对应底物，即起催化水解或氧化还原反应而呈颜色。残留农药检测方法免疫分析法第15页

其所生成颜色深浅与欲测抗原（抗体）含量成正比。这种有色产物可用肉眼、光学显微镜、电子显微镜