免疫组化方法归总.docxVIP

免疫组化染色(免疫组织化学染色)

一、染色前需要配制的溶液：

○1柠檬酸盐缓冲液（抗原修复液）：

?储存液：A：4.2g柠檬酸C6H8O7·H2O用蒸馏水定容至200ml

B：7.35g柠檬酸钠Na3C6H5NO3O7·2H2O用蒸馏水定容至250ml

?工作液：9mlA液+41mlB液+450mlDW=500ml。（ph值应为6.0+0.1）

○2 Tris—Hcl (PH应为7.2)

?储存液：A： Tris液：Tris4.85g用蒸馏水定容至200mlB： Hcl ：体积分数35%Hcl1ml+99ml蒸馏水

?工作液：25mlA+45mlB+30ml蒸馏水（PH应为7.2）

*○3 0.05%DAB：

0.005gDAB+10mlTris—Hcl（也即：0.005gDAB+2.5ml（Tris—Hcl）A液+4.5ml（Tris—Hcl）B+3ml蒸馏水）

（应于-200C避光保存或避光现配现用，最好现配现用，否则可能在空气中因氧化而由无色变为棕色）

*○4显色剂：0.05%DAB与HO（0.3%），即5ml0.05%DAB中加一滴3%HO（0.05ml）{此步骤稍提前准备，现配现用}

22 22

○5磷酸盐缓冲液配制（在此需用0.01