病毒与细胞的相互作用.ppt

（二）空斑试验plaqueassay细胞单层接种病毒后再覆盖一层含营养液的琼脂层。这样病毒自然感染释放后不能悬浮于液体中，只能感染邻近与之接触的细胞，以致感染区由原始病灶向四周扩大，形成类似细菌的菌落，此即空斑试验。第32页,共46页，2024年2月25日，星期天第33页,共46页，2024年2月25日，星期天第34页,共46页，2024年2月25日，星期天第35页,共46页，2024年2月25日，星期天第36页,共46页，2024年2月25日，星期天空斑是由一个感染性病毒粒子复制形成的，类似于细菌的菌落，称为空斑形成单位（PFU）。病毒悬液中的感染性病毒量以每毫升含有的PFU来表示。CELLS第37页,共46页，2024年2月25日，星期天第38页,共46页，2024年2月25日，星期天空斑试验的用途：1.测定病毒数量2.纯化病毒单个空斑作悬液，梯度稀释后再作空斑，可获得病毒克隆。3.鉴定病毒不同病毒的空斑具有不同的特征。第39页,共46页，2024年2月25日，星期天（三）包涵体（inclusionbody)定义：是某些病毒感染细胞产生的特征性的形态变化，在普通光学显微镜下可见胞浆或胞核内出现的呈嗜酸性或嗜碱性染色、大小数量不等的圆形或不规则形的团块状结构，称为包涵体，又称为内基氏小体（Negribody）。第40页,共46页，2024年2月25日，星期天包涵体的性质病毒成分的蓄积，如狂犬病毒的Negri氏体大量晶格样排列的病毒颗粒组成，如腺病毒的包涵体细胞变性的产物，不含病毒，如疱疹病毒的包涵体第41页,共46页，2024年2月25日，星期天狂犬病毒包涵体（Negribody）第42页,共46页，2024年2月25日，星期天定义：细胞利用內源或外源的小分子双股RNA片段，特异性地降解同源基因的mRNA，从而导致靶基因转录后基因沉默（posttranslationalgenesilence,PTGS）的现象。二、RNA干扰（RNAinterference,RNAi）第43页,共46页，2024年2月25日，星期天定义：由病毒或诱生剂刺激机体细胞产生的具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节作用的糖蛋白。种类：α、β、γ干扰素。抗病毒作用：干扰素不直接作用于病毒，而是作用于邻近的细胞，使其产生抗病毒蛋白，这些抗病毒蛋白降解病毒mRNA、抑制蛋白合成。干扰素作用具有宿主特异性，而无病毒特异性。三、干扰素（IFN）第44页,共46页，2024年2月25日，星期天干扰素抗病毒机制第45页,共46页，2024年2月25日，星期天感谢大家观看第46页,共46页，2024年2月25日，星期天**关于病毒与细胞的相互作用第四章病毒与细胞间的相互作用第一节病毒的细胞培养第二节病毒与细胞的相互作用第2页,共46页，2024年2月25日，星期天第一节病毒的细胞培养病毒是严格的细胞内寄生微生物，培养病毒必须使用细胞。根据病毒的不同选用敏感动物（动物接种）、鸡胚（鸡胚接种）或离体细胞进行分离培养（细胞培养）。第3页,共46页，2024年2月25日，星期天一、动物接种接种后通常以动物发病、死亡作为感染的指标。按病毒侵袭部位不同选择适当的接种途径。嗜神经病毒接种在小鼠的脑内。痘苗病毒和单纯疱疹病毒接种于家兔角膜。第4页,共46页，2024年2月25日，星期天动物接种的优缺点：优点：（1）不需要复杂的仪器设备；（2）技术简单；（3）易成功缺点：（1）个体差异大（2）价格昂贵（3）数量有限（4）需要隔离畜舍第5页,共46页，2024年2月25日，星期天二、鸡胚接种一种比较经济简便的方法。卵壳壳膜第6页,共46页，2024年2月25日，星期天接种途径绒毛尿囊膜接种9-13日龄

尿囊腔接种9-10日龄卵黄囊接种6-8日龄羊膜腔接种10日龄脑内接种10日龄第7页,共46页，2024年2月25日，星期天1气室2卵壳3卵黄囊4卵白5尿囊腔6绒毛尿囊7胚胎8羊水腔9胚胎外腔第8页,共46页，2024年2月25日，星期天第9页,共46页，2024年2月25日，星期天第10页,共46页，2024年2月25日，星期天鸡胚接种的优缺点：优点：技术简单、来源充沛、价格低廉