盐诱导激酶抑制剂HG-9-91-01对小鼠脓毒症相关认知功能障碍的保护作用及其机制_NormalPdf.docxVIP

2023,48(12)

2023,48(12)

1793JCentSouthUniv(MedSci)

1793

DOI：10.11817/j.issn.1672-7347.2023.230208

盐诱导激酶抑制剂HG-9-91-01对小鼠脓毒症相关认知功能障碍的保护作用及其机制

王雪琴1,2，王双3，崔艳慧1

(1.中南大学基础医学院人体解剖学与神经生物学系，长沙410013；2.长沙医学院神经变性病基础与临床

湖南省普通高等学校重点实验室，长沙410219；3.中南大学湘雅医院检验科，长沙410008)

[摘要]目的：脓毒症相关认知功能障碍是脓毒症患者常见的并发症，目前病理机制不明，缺乏有效的防治手段。盐诱导激酶(salt-inducedkinase，SIK)是调节代谢、免疫、炎症反应等的重要分子，与多种神经系统疾病的发生和发展相关。本研究旨在探讨SIK在脓毒症小鼠海马中的表达，以及SIK抑制剂HG-9-91-01在脓毒症相关认知功能障碍中的作用及其机制。方法：首先，将C57BL/6小鼠随机分为对照组(Con组)和脓毒症模型组[脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)组]。LPS组小鼠以8mg/kg的剂量腹腔注射LPS，Con组小鼠予注射等体积生理盐水。在注射后1、3、6d取小鼠海马组织，分别采用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitativePCR，qPCR)和蛋白质印迹法检测SIK1、SIK2、SIK3的mRNA和蛋白质的表达水平。然后，将小鼠随机分为Con组、LPS组、SIK抑制剂组(HG组)。LPS组和HG组注射LPS构建脓毒症模型，HG组在注射LPS后的第3~6天以10mg/kg的剂量腹腔注射HG-9-91-01，LPS组注射等体积溶媒。在注射LPS后的第7~11天进行Morris水迷宫实验(Morriswatermaze，MWM)以评估3组小鼠的认知功能。行为学检测后取3组小鼠的海马组织，采用qPCR检测炎症因子和小胶质细胞标志分子的mRNA表达水平，蛋白质印迹法检测诱导型一氧化氮合酶(induciblenitricoxidesynthase，iNOS)、CD68、离子钙结合衔接分子1(ionizedcalciumbindingadaptormolecule1，Iba-1)、N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate，NMDA)受体(NMDAreceptor，NR)亚型、cAMP反应元件结合蛋白(cAMPresponseelement-bindingprotein，CREB)调控的转录共激活因子1(CREB-regulatedtranscriptioncoactivator1，CRTC1)、胰岛素样生长因子1(insulin-likegrowthfactor1，IGF-1)的蛋白质表达水平，免疫组织化学(immunohistochemistry，IHC)检测海马CA1区、CA3区、齿状回(dentategyrus，DG)Iba-1阳性细胞的表达，并进行Sholl分析。结果：与Con组比较，LPS组小鼠海马组织SIK1、SIK2、SIK3的mRNA和蛋白质表达水平均上调(均P0.05)。与Con组比较，LPS组小鼠的逃避潜伏期明显延长，目标象限停留时间百分比降低，运动速度下降(均P0.05)；与LPS组相比，HG组小鼠的逃避潜伏期明显缩短，目标象限停留时间百分比增加(均P0.05)。与Con组比较，LPS组海马组织炎症因子[肿瘤坏死因子α(tumornecrosisfactor-α,TNF-“)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素6(interleukin-6，IL-6)]和I型小胶质细胞标志分子iNOS、CD68的mRNA表达均上调，而II型小胶质细胞标志分子CD206和精氨酸酶-1(arginase-1，Arg-1)的mRNA表达均下调；与LPS组比较，HG组TNF-“、IL-1β、IL-6、iNOS的mRNA表