【医学免疫学实验】溶血实验.ppt

实验内容实验三补体参与的溶血反应实验四免疫血清的制备掌握补体溶血反应原理。熟悉溶血反应操作、结果观察,免疫血清制备原理,操作过程及应用。了解补体CH50的测定。目的要求实验三补体参与的溶血反应【原理】山羊红细胞抗原与其相应抗体（溶血素）结合后，通过经典途径激活补体，产生膜攻击作用，最后导致红细胞溶解，发生溶血反应。Ag+Ab补体活化裂解经典激活途径原理:2%绵羊红细胞溶血素补体：豚鼠血清NS试管、吸管、水浴箱等。材料：2.37℃水浴30min，判定结果。1.取试管四支，编号，按下表加入各物。方法：0.250.50.50.751.管内液体透明呈红色为溶血。2.管内液体浑浊呈浅红色为不溶血。3.根据所学知识分析各管结果出现的原因完全溶血不溶血结果：实验四免疫血清的制备【原理】将适当的抗原物质注入动物体内，经过一定时间，动物血清中可出现大量特异性抗体，这种含抗体的血清称为免疫血清（多克隆抗体）。优质免疫血清的产生，主要取决于抗原的纯度和免疫原性，以及动物应答的能力。此外，尚需考虑免疫途径、抗原剂量、注射次数、时间间隔、有无佐剂等因素。天然抗原刺激多种B淋巴细胞克隆产生的多种抗体的混合物。多克隆抗体(polyclonalantibody,pcAb)免疫血清的制备流程一、免疫动物的选择二、免疫程序三、动物采血法四、抗血清的鉴定五、抗血清的纯化、保存抗原来源与动物种属的关系种属差异越远，免疫原性越强动物个体的选择适龄、健康、体重符合要求抗原的性质一、免疫动物的选择免疫原的剂量免疫间隔时间免疫途径皮内、皮下、肌肉、静脉、腹腔、淋巴结二、免疫程序颈动脉采血法家兔、绵羊、山羊心脏采血法家兔、豚鼠、大鼠、鸡静脉采血法家兔、山羊、绵羊三、动物采血法抗体特异性的鉴定双向免疫扩散法抗体效价的鉴定凝集试验、双向免疫扩散试验抗体亲合力的鉴定抗体纯度的鉴定四、抗血清的鉴定五、抗血清的纯化、保存纯化目的是除去这些不相关成分，防止抗血清中其他杂抗体干扰试验结果。2℃～8℃保存：短期保存冰冻保存：保存5年真空干燥保存：保存5～10年例：兔抗羊红细胞抗血清（溶血素）的制备日期（天）第1天第3天第5天第7天第12天第15天途径皮内皮内皮内皮内静脉静脉抗原全血全血全血全血20%悬液20%悬液剂量(ml)0．51．01．52．01．02．0材料：1.动物家兔、绵羊。2.试剂Alsever’s液、生理盐水、佐剂。3.器材注射器、碘酒、酒精、毛细滴管。常用免疫接种技术皮内接种皮下接种腹腔接种耳缘静脉接种