乳及乳制品中2-岩藻糖基乳糖、乳糖-N-新四糖含量的测定 液相色谱-串联质谱法.pdf

乳及乳制品中2-岩藻糖基乳糖、乳糖-N-新四糖含量的测定

液相色谱串联质谱法

1范围

本文件规定了乳及乳制品中2′-岩藻糖基乳糖、乳糖-N-新四糖的液相色谱串联质谱测定方法。

本文件适用于液体调制乳、发酵乳以及以牛乳和羊乳为原料的婴幼儿调制乳粉中2′-岩藻糖基乳糖、

乳糖-N-新四糖的含量测定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

样品经乙醇溶液沉淀提取，低温高速离心，除去脂肪蛋白，样品中的低聚糖经硼氢化钠还原成结构

相同的开环结构，经高效液相色谱串联质谱仪测定，基质外标法定量。

5试剂和材料

除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，实验用水为GB/T6682规定的一级水。

5.1试剂

5.1.1乙腈（CHN），色谱纯。

23

5.1.275%乙醇（CHO）。

26

5.1.3甲酸铵（NHHCO），优级纯及以上。

42

5.1.4硼氢化钠溶液（10g/L）：优级纯硼氢化钠（NaBH），称取1.0g硼氢化钠，加入80mL水，

4

溶解后，用水定容至100mL，现用现配。

5.1.5乙酸溶液（15mL/L）：优级纯乙酸，吸取1.5mL乙酸，用水稀释至100mL。

5.1.6甲酸铵溶液（10mmoL/L）：称取0.318g甲酸铵，用水溶解并定容到500mL中，混匀。

5.1.72-岩藻糖基乳糖（CHO）：CAS号41263-94-9，纯度≥95%，或经国家认证并授予标准物

183215

质证书的标准物质。

5.1.82-岩藻糖基乳糖标准储备液（10mg/mL）：准确称取100mg2-岩藻糖基乳糖（按照实际纯度折

算质量），用水溶解稀释并定容10mL。分装后置于-18℃条件可储存6个月。

5.1.9乳糖-N-新四糖标准品（CHNO）：CAS号13007-32-4，纯度95%，或经国家认证并授

264521≥

予标准物质证书的标准物质。

1

5.1.10乳糖-N-新四糖标准储备液（10mg/mL）：准确称取100mg乳糖-N-新四糖（按照实际纯度折算

质量），用水溶解稀释并定容10mL。分装后置于-18℃条件可储存6个月。

5.1.112-岩藻糖基乳糖和乳糖-N-新四糖混合标准中间液：分别准确吸取1mL2-岩藻糖基乳糖标准储

备液和0.5mL乳糖-N-新四糖标准储备液于10mL容量瓶中，并用水定容至刻度配制成2-岩藻糖基乳

糖浓度为1mg/mL、乳糖-N-新四糖浓度为0.5mg/mL的标准物质中间液，置于-18℃条件可储存6个月。

5.1.12混合标准工作液：可采用同类样品类型的空白基质溶液或水配制，2-岩藻糖基乳糖标准工作液

参考浓度1.0μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL、40.0μg/mL，乳糖-N-新四糖标

准工作液参考浓度0.50μg/mL、1.00μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL。

5.2材料

5.2.1离心管：2mL，15mL。

5.2.210mL比色管。

5.2.310mL容量瓶。

5.2.4微孔滤头：有机相，0.22μm。

6仪器和设备

6.1液相色谱-串联质谱仪（LC-MS/MS）。

6.2色谱柱，ACQUITYBEHAmideColumn(150×2.1mm,1.7μm,Waters)或性能相当着。

6.3移液器，量程10μL-100μL和100μL-1