微生物检验方法验证方案.docx

第

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微生物限度检查方法（平皿法）

验证方案

目 录

一、验证方案的制定

二、验证方案的起草与审批

三、微生物限度检查方法（平皿法）验证方案

验证目的和原理

验证方法步骤

试验实施

试验前的准备

验证试验操作

试验结果

验证结果评价分析

附件

微生物限度检查方法（平皿法）验证文件

验证项目名称编号

验证项目名称

编号

微生物限度检查方法（平皿法）验证

VF-PR-17-A

验证小组组员

步骤

实施日期

验证方案组织实施进度

成员职务

姓名

主要工作职责

组长

副组长

方案设计责任人

方案实施负责人

组员

操作人

操作人操作人

操作人

二、验证方案的起草与审批

验证项目名称编号微生物限度检查方法（平皿法）验证

验证项目名称

编号

微生物限度检查方法（平皿法）验证

VF-PR-17-A

日

日

日

起草部门起草人签名

起草部门

起草人签名

日期

生产部

年

月

质控部

年

月

2．验证方案的审核与批准验证方案审核人：

审核日期：

年

月

验证方案批准人：

批准日期：

年

月

三、微生物限度检查方法（平皿法）验证方案

验证目的和原理

验证目的

为确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌、酵母菌数的测定，特制定本方案。验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需要变更时，应报验证委员会批准。

原理

通过比较试验4组中试验菌的恢复生长结果来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性。

验证方法步骤

验证前的准备 进行微生物限度检查方法（平皿法）验证前，所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有影响。试验菌应包括G-、G+、酵母菌和霉菌类微生物以基本覆盖样品中可能存在的微生物。

验证试验的操作计划 用3个不同批号产品按照微生物限度检测方法进行平行试验，通过计算回收率来判断微生物限度检查方法是否对产品有影响。

试验结果可接受标准 用标准菌株评价方法“尿素维生素E乳膏的微生物限度检查”对检品中微生物的抑制性，试验结果应显示3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率应不小于70%，试验组的回收率也不低于70%。3．试验实施

试验前的准备

主要仪器设备：高压蒸汽灭菌器、恒温烘干箱、净化工作台、生物安全柜、

恒温培养箱、霉菌培养箱。

操作环境：操作间应该安装空气除菌过滤层流装置。环境洁净度不应低于10000级，局部洁净度为100级（或防置同等级净化工作台）。操作间或净化工作台的洁净空气应该保持对环境形成正压，不低于4.9pa。

试验样品：尿素维生素E乳膏：

批号 批号 批号

稀释液和试剂：PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液 无菌十四烷酸异丙酯

器具 无菌培养皿：（直径90mm） 无菌移液管（5ml）

菌株名称内控编号大肠埃希菌金黄色葡萄球菌

菌株名称

内控编号

大肠埃希菌

金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌

黑曲霉

编号由菌名首字母—传代代数—制备日期组成

培养基

名称营养琼脂培养基

改良马丁琼脂培养基

验证试验操作

生产商 培养基批号 配制日期 有效期

试验菌的制备和稀释

将大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌接种至10ml的无菌营养肉汤中在30～35℃下培养18～24小时，将白色念珠菌接种至良马丁流体培养基中，23～28℃下培养24～48小时。将黑曲霉接种至改良马丁琼脂培养基中，在23～

28℃下培养5～7天小时。将上述培养物用0.9%的无菌氯化钠溶液制成每1ml含

菌落数为50～100cfu的菌悬液。

用不同类别的微生物考察供试液及检验程序的抑菌性，将试验分为4组

A样品试验组准确取供试品10g，加至含20ml无菌十四烷酸异丙酯和无菌玻璃珠的适宜容器中，必要时可增加十四烷酸异丙酯的用量，充分振摇，使供试品溶解。然后加入45℃的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml，振摇5～10分钟，萃取，静置使油水明显分层，取其水层作为1：10的供试液。

用移液管准确吸取1.0ml供试液至平皿中；并在每个平皿中接种50～100cfu试验菌，立即倾注营养琼脂培养基，每个试验菌平行接种2个平皿，按照平皿法测定其菌数。

B菌液组在平皿中注入1ml的菌液立即倾注营养琼脂培养基，以测定所加的菌数。

C供试品对照组取规定量的供试液，按菌落计数方法测定供试品的本底菌数。

D稀释剂对照组取相应稀释液1ml加入试验菌，使最终菌浓度为每ml供试液含50～100cfu试验菌，按试验组的供试液制备方法和菌落计数方法测定其菌落数。

培养将大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌在30～50℃下培养48小时将白色念珠