灭菌方法与生物指示剂.ppt

抗生素生产：培养基、种子罐和发酵罐——压力蒸汽法；无菌空气——过滤法；最终产品——过滤法。水和空气：过滤法、甲醛蒸气法。包装材料：玻璃材质的安瓿、西林瓶——干热法；聚乙烯、聚丙烯等塑料包装材料等——100℃蒸汽；橡胶塞等——湿热法。第31页,共43页，2024年2月25日，星期天厂房设施、设备和工器具：不锈钢制密闭设备、管道——压力蒸汽；小的设备零部件、工器具和容器——干热法或湿热法；耐酸碱而不耐高温的塑料材质物品——过氧化氢法；洁净工作服、清洁工具——压力蒸汽法。第32页,共43页，2024年2月25日，星期天常用灭菌方法汇总第33页,共43页，2024年2月25日，星期天第34页,共43页，2024年2月25日，星期天第35页,共43页，2024年2月25日，星期天生物指示剂的使用选择合适的生物指示剂正确使用生物指示剂放置位置、数目、放置的方式使用之后的处理第36页,共43页，2024年2月25日，星期天选择合适的生物指示剂第37页,共43页，2024年2月25日，星期天生物指示剂的放置位置应放在灭菌最困难的地方：①在灭菌器中最大包装的中心；②灭菌器排气口，往往不易达到灭菌温度；③靠灭菌器的门口和底部；④不同的生物指示剂摆放要求不同。第38页,共43页，2024年2月25日，星期天根据设备规格调整指示剂数量，建议不少于2支，一般每个灭菌周期使用不少于10支。冷藏保存的生物指示剂使用前须室温放置1-2小时。生物指示剂的放置数目第39页,共43页，2024年2月25日，星期天至少一支未灭菌的作为阳性对照阳性结果都要高压灭菌后才可丢弃有些BI含有阴性对照的，需要一同灭菌后培养正确使用生物指示剂第40页,共43页，2024年2月25日，星期天孢子数测定1.涡旋振荡仪将纸片浸渍混匀直至成匀浆2.热击10-15min、冰浴2min3.系列稀释，每次移液前需振荡混匀4.TSA浇注法适宜温度倒置培养48h5.计数为验证说明书上的孢子数，根据美国药典及ISO11138，恢复的孢子数所占的百分比应为50%—+300%。第41页,共43页，2024年2月25日，星期天枯草芽孢杆菌孢子数的测定恢复率=94%第42页,共43页，2024年2月25日，星期天感谢大家观看第43页,共43页，2024年2月25日，星期天harmonySGM概要灭菌法和生物指示剂生物指示剂的形式无菌保证水平灭菌工艺验证常用灭菌方法制药工业常用的灭菌方法生物指示剂的使用孢子数测定第2页,共43页，2024年2月25日，星期天灭菌法和生物指示剂灭菌法系指用适当的物理或化学手段将物品中活的微生物杀灭或除去，从而使物品残存活微生物的概率下降至预期的无菌保证水平的方法。生物指示剂系一类特殊的活微生物制品，可用于确认灭菌设备的性能、灭菌程序的验证、生产过程灭菌效果的监控等。用于灭菌验证中的生物指示剂一般是细菌的孢子。第3页,共43页，2024年2月25日，星期天生物指示剂的形式一定数量的孢子附着在惰性载体上，如滤纸条、玻片、不锈钢、塑料制品等孢子悬浮液密封于安瓿中第4页,共43页，2024年2月25日，星期天无菌保证水平无菌保证水平一批物品的无菌特性只能相对地通过物品中活微生物的概率低至某个可接受水平来表述，即SAL（sterilityassurancelevel）。我国及欧美药典都把SAL不得大于百万分之一作为最终灭菌产品无菌保证的要求，即SAL≤10－6第5页,共43页，2024年2月25日，星期天灭菌工艺验证验证一个灭菌工艺系统能否使产品灭菌后达到无菌要求,通常认为灭菌后微生物残存概率小于1×10-6。物理性验证：通过得到的热分布与热穿透数据,来估测一个灭菌程序对微生物的致死性。化学指示剂验证：物品包外用化学指示剂用于验证物品是否经过灭菌处理，物品包内中心部位的化学指示剂才可作为物品是否达到灭菌的参考标志。生物指示剂验证：将已知其耐热性的生物指示剂直接接种在产品溶液或相似溶液中进行验证,是评判灭菌工艺杀灭效果最直观有效的方法,也是灭菌工艺验证必不可少的试验。第6页,共43页，2024年2月25日，星期天常用的灭菌方法湿热灭菌法干热灭菌法气体灭菌法辐射灭菌法过滤除菌法第7页,共43页，2024年2月25日，星期天不同灭菌方式不同的菌种种类的选择