瑞氏染色分析和总结.docx

瑞氏染色法

瑞氏染色法(Wrightsstain;美蓝－伊红Y）：用瑞氏染色液对细菌进行染色以便进行显微镜检查的染色法。

．瑞氏染料是由碱性染料美蓝（Methvlemblue）和酸性染料黄色伊红（EostmY）合称伊红美蓝染料即瑞氏（美蓝－伊红Y）染料。

伊红钠盐的有色部分为阴离子，无色部分为阳离子，其有色部分为酸性，故称伊红为酸性染料。美蓝通常为氯盐是碱性的，美蓝的中间产物结晶为三氯化镁复盐，其有色部分为阳离子，无色部分为阴离子，恰与伊红钠盐相反。

．用甲醇作瑞氏染料溶剂，即成瑞氏染液。甲醇是瑞氏染料良好溶剂，有两种作用：

（1）甲醇使瑞氏染料中美蓝（M）与伊红（E）在溶液中离解，可使细胞成分选择性吸附其中的有色物质而着色。

甲醇

ME（瑞氏染料）————→M++E-

在配制的瑞氏染液中美蓝如放置过久即可氧化而含有天青，美蓝天青与伊红化合物能使核染成紫红色，但不能使胞浆染为蓝色，多余美蓝就可以使胞浆染成蓝色，染色主要是化学作用，是离子彼此结合的反应。

（2）甲醇具有强大的脱水力，可将细胞固定在一定形态及增加细胞结构的表面积，提高细胞对染料吸收作用，同时由于甲醇吸附染色液中的水，使染色液升温，加速染色反应。

3.瑞氏染液配制：

瑞氏染液配制：瑞氏染料 830gm 或1g

甲醇（AR）500ml 或600ml

先称干燥（事先放入温箱干燥过夜）瑞氏染料放置乳钵内， 用乳棒轻轻 敲碎染料成粉末，再行研磨至听不到 研芝麻声 即呈细粉末，加少许甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸内显“一面镜”光泽，而无染料粉粒沉着，再加较多量甲醇研磨呈一面镜光亮，静置片刻，将上层液体倒入 一清洁储存瓶内（最好用甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重复数次，直至乳钵内染料及甲醇用完为止，摇匀，密封瓶口，存室温暗处，储存愈久，

则染料溶解、分解就越好，一般储存 3个月以上为佳。

缓冲液：

1)缓冲液作用：染色对氢离子浓度是十分敏感的，据观察 pH值的改变，可使蛋白质与染料形成的化合物重新离解。 缓冲液须保持 一定的pH使染色稳定， PBS的pH一般在6.4~6.8 ，偏碱性染料可与缓冲液中 酸基起 中和作用，偏酸性染料则与缓冲液中的碱基起中和作用，使 pH恒定。

2)缓冲液配制（ pH6.4~6.8 ，弱酸性）：配方1：配方2：

1%KH2PO430mlM/15KH2PO473.5ml

1%Na2HPO420mlM/15Na2HPO426.5ml

H2O( 新鲜)加至1000ml

置室温黑暗处，瓶口密封，防止霉菌污染，如有污染则应报废。简易步骤介绍：

1、取病料涂片、自然干燥

2、滴加瑞氏染液染3分钟,使标本被其中甲醛所固定;

3、加等量PH6.4的磷酸盐缓冲液(或等量超纯水)轻轻晃动玻片,均匀静置5分钟;

4、水洗、吸干、镜检。

5、细菌染成蓝色，组织细胞胞浆红色，细胞核蓝色。